BD, 560414, BD Pharmingen™ PE Rata anti-Ratón Foxp3

Nombre alternativo: Caja Forkhead P3; Proteína de caja Forkhead P3; JM2; Scurfin; Scurfy; Sf
Reactividad: Ratón (Prueba de control de calidad)
Isotipo: IgG2b de rata, κ
Inmunógeno: proteína recombinante FoxP3 de ratón
Aplicación: Tinción intracelular (citometría de flujo) (Probado rutinariamente)
Concentración: 0,2 mg/ml
ID de registro: AB_1645251
Tampón de almacenamiento: Solución tamponada acuosa que contiene ≤0,09 % de azida sódica.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad. Conservar sin diluir a 4 °C y protegido de la exposición prolongada a la luz. No congelar. El anticuerpo se conjugó con el colorante en condiciones óptimas y se eliminaron el anticuerpo no conjugado y el colorante libre.
Procedimientos de ensayo recomendados: Procedimientos de ensayo recomendados Preparación celular y procedimientos de tinción para el anticuerpo anti-Foxp3 de ratón conjugado 1. Prepare soluciones de trabajo del juego de tampones BD Pharmingen™ Mouse Foxp3, n.º de cat. 560409 (para la preparación del tampón, consulte las instrucciones del tampón TDS, n.º de cat. 560409 para obtener más información). 2. Precaliente el tampón de permeabilización a 37 °C antes de usar. Mantenga el tampón de fijación en hielo. 3. Prepare una suspensión de células individuales del tejido linfoide periférico de interés. Retire los grupos de células o los residuos pasando la suspensión a través de un colador de células de nailon de 70 µm. Utilice 1 × tampón de lisis BD PharmLyse™ (n.º de cat. 555899) para lisar los glóbulos rojos si es necesario. Diluir las células con tampón de tinción BD Pharmingen™ (FBS, n.º de cat. 554656) a diez millones de células/ml. 4. Pipetear la cantidad apropiada de CD4 u otro reactivo de tinción de superficie al fondo de cada tubo de 12 x 75 mm. 5. Añadir 100 µl de células por tubo, mezclar bien. Incubar durante 20 minutos a temperatura ambiente en la oscuridad. 6. Para lavar las células, añadir 2 ml de tampón de tinción BD Pharmingen™ (FBS) a cada tubo. Centrifugar a 250 xg durante 10 minutos y retirar el tampón. 7. Para fijar las células, resuspender suavemente el pellet en el volumen residual del tampón de tinción y, a continuación, añadir 2 ml de tampón de fijación BD Pharmingen™ Mouse Foxp3 1 x frío recién preparado. Mezclar bien. Incubar durante 30 minutos a 4 °C en la oscuridad. 8. Centrifugue a 500 xg durante 5 minutos y retire el fijador. 9. Para lavar las células, resuspenda cada pellet en 2 ml de tampón de permeabilización BD Pharmingen™ Mouse Foxp3 1 × recién preparado y precalentado, y centrifugue a 500 xg durante 5 minutos. Retire el tampón de permeabilización. 10. Para permeabilizar las células, resuspenda suavemente el pellet en otros 2 ml de tampón de permeabilización BD Pharmingen™ Mouse Foxp3 1 x recién preparado y precalentado. Incube durante 30 minutos a 37 °C en la oscuridad. 11. Centrifugue a 500 xg durante 5 minutos y retire el tampón. 12. Para lavar las células, añada 2 ml de tampón de tinción BD Pharmingen™ (FBS) a cada tubo, centrifugue a 500 xg durante 5 minutos. Retire el tampón. 13. Añada 20 µl de anticuerpo Foxp3 conjugado diluido con tampón de tinción BD Pharmingen™ (FBS) a las concentraciones adecuadas (consulte la leyenda de la figura de cada formato para conocer la concentración) para resuspender el pellet. Agite suavemente o agite brevemente en vórtex. 14. Incube durante 20 minutos a temperatura ambiente en oscuridad. 15. Repita el paso de lavado n.º 12 dos veces. 16. Resuspenda las células en 0,5 ml de tampón de tinción BD Pharmingen™ (FBS) y analice inmediatamente.* Nota: Recomendamos usar el tampón de tinción BD Pharmingen™ en todos los pasos de lavado y cubrir los tubos durante los pasos de incubación con tapas o parafilm. También recomendamos optimizar los voltajes de dispersión frontal y lateral para visualizar los linfocitos separados de los residuos, los glóbulos rojos, etc. antes de la adquisición. * Adquiera al menos entre 15 000 y 25 000 linfocitos CD4 positivos. Las BD® CompBeads pueden utilizarse como sustitutos para evaluar la dispersión de fluorescencia (compensación). Cuando los anticuerpos conjugados con fluorocromos se unen a las BD® CompBeads, presentan propiedades espectrales muy similares a las de las células. Sin embargo, para algunos fluorocromos puede haber pequeñas diferencias en las emisiones espectrales en comparación con las células, lo que resulta en valores de dispersión que difieren de los controles biológicos. Se recomienda encarecidamente que, al utilizar un reactivo por primera vez, los usuarios comparen la dispersión en las células y en las BD® CompBeads para asegurarse de que estas sean adecuadas para su aplicación celular específica.
Avisos del producto: Dado que las aplicaciones varían, cada investigador debe titular el reactivo para obtener resultados óptimos. Consulte los protocolos técnicos en www.bdbiosciences.com/us/s/resources. Para obtener información sobre los espectros de fluorocromos y la configuración adecuada del instrumento, consulte nuestra página web de citometría de flujo multicolor en www.bdbiosciences.com/colors. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico, altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Consulte http://regdocs.bd.com para acceder a las fichas de datos de seguridad (FDS).