BD, 560499, BD™ CompBead Plus Anti-Rat Ig, κ/Control Negativo (BSA) Compensation Plus (7,5 µm) Juego de Partículas

Aplicación: Citometría de flujo (probada rutinariamente)
Estado regulatorio: RUO
ID de registro: AB_10642581
Descripción: Las microesferas BD™ CompBead Plus Anti-Rat Ig, κ son partículas de poliestireno que se utilizan para establecer la compensación de fluorescencia en análisis de citometría de flujo multicolor. El kit contiene dos tipos de partículas: las BD™ CompBead Plus Anti-Rat Ig, κ, que se unen a cualquier inmunoglobulina de rata portadora de cadena ligera κ, y las partículas BD™ CompBead Plus de Control Negativo (BSA), que no tienen capacidad de unión. Al mezclarlas con un anticuerpo de rata conjugado con fluorocromo, las BD™ CompBead Plus proporcionan poblaciones con tinción positiva y negativa (fluorescencia de fondo) diferenciadas, que permiten establecer los niveles de compensación manualmente o mediante el software de configuración del instrumento. Dado que los ajustes de compensación se realizan con el mismo anticuerpo marcado con fluorocromo que se utilizará en el experimento, este método permite al investigador establecer con mayor precisión correcciones de compensación por superposición espectral para cualquier combinación de anticuerpos marcados con fluorocromo (sin necesidad de utilizar muestras de tejido valiosas ni microesferas teñidas con espectros de fluorescencia potencialmente dispares). Se recomienda encarecidamente el uso de BD™ CompBead Plus en todos los experimentos que utilicen conjugados de colorante en tándem (es decir, PE-Cy™7, APC-Cy™7, etc.), ya que cada conjugado puede tener características espectrales distintas.
Preparación y almacenamiento: Conservar sin diluir a 4 °C y protegido de la luz. No congelar.
Procedimientos de ensayo recomendados: Nota sobre los procedimientos de ensayo recomendados: Los reactivos conjugados BD Horizon™ V500 y AmCyan pueden mostrar diferencias significativas en el espectro de emisión en las células teñidas y cuando se capturan en BD™ CompBeads. Por lo tanto, los valores de derrame para estos colorantes evaluados con BD™ CompBeads pueden no proporcionar una compensación correcta para las células. Por lo tanto, se recomiendan controles celulares teñidos individualmente para configurar la compensación para AmCyan y los reactivos BD Horizon™ V500. BD Horizon™ V500-C se ha modificado para minimizar estas diferencias espectrales y BD™ CompBeads se puede utilizar para determinar los valores de derrame para los anticuerpos RUO conjugados con BD Horizon™ V500-C. Sin afectar la función de compensación, algunos lotes pueden perfilarse como un histograma bimodal, lo que puede ser posible debido a la dispersión de luz inherente y/o la agregación residual de las partículas de compensación. La optimización del voltaje del instrumento o las condiciones de activación pueden ser útiles para mejorar la visualización del histograma. Este juego BD™ CompBead Plus se ha probado con anticuerpos Ig de rata conjugados con diversos fluorocromos y se ha analizado con un citómetro de flujo BD FACS para garantizar la especificidad y la reactividad de las partículas. Consulte las instrucciones específicas a continuación sobre el uso del juego BD™ CompBead Plus: 1. Agite bien el BD™ CompBead Plus antes de usarlo. 2. Etiquete un tubo de muestra de 12 x 75 mm por cada anticuerpo Ig, κ de rata conjugado con fluorocromo que se vaya a utilizar en un experimento determinado. 3. Añada 100 µl de tampón de tinción [p. ej., BD Pharmingen™ Stain (FBS), n.º de cat. 554656 o BD Pharmingen™ Stain (BSA), n.º de cat. 554657] a cada tubo. 4. Añada 1 gota completa (aproximadamente 60 µl) del control negativo BD™ CompBead Plus (BSA) y 1 gota de las microesferas BD™ CompBead Plus Anti-Rat Ig, κ a cada tubo y agite en vórtex. 5. Añada 20 µl de cada stock de anticuerpo prediluido (diluido a una concentración óptima para teñir 10^6 células) que se va a analizar en un experimento determinado al tubo etiquetado adecuadamente. (Asegúrese de que el anticuerpo se deposite en la mezcla de microesferas y luego agite en vórtex). 6. Incube de 15 a 30 minutos a temperatura ambiente. Protéjalo de la exposición a la luz directa. 7. Durante la incubación de las microesferas y el anticuerpo, configure los ajustes de voltaje del PMT del citómetro de flujo utilizando el tejido diana para el experimento dado (p. ej., sangre completa, esplenocitos, etc.). Si no está seguro, utilice las perlas de control negativo (BSA) BD™ CompBead Plus como punto de referencia negativo y continúe. 8. Después del paso de incubación (consulte el paso 6 anterior), añada 2 ml de tampón de tinción a cada tubo y sedimente mediante centrifugación a 200 xg durante 10 minutos. 9. Deseche el sobrenadante de cada tubo mediante aspiración al vacío cuidadosa con una pipeta Pasteur de punta fina. 10. Resuspenda el sedimento de perlas en cada tubo añadiendo 0,5 ml de tampón de tinción a cada tubo. Agite bien en vórtex. 11. Analice cada tubo por separado en el citómetro de flujo. Seleccione la población de perlas singlete en función de las características FSC (dispersión de luz frontal) y SSC (dispersión de luz lateral). 12. Ajuste la velocidad de flujo a 200-300 eventos por segundo si es posible. 13. Use la herramienta de compensación en el software BD FACSDiva™ para calcular la compensación para su experimento, o vaya al paso 14 para ajustar manualmente los valores de compensación. 14. Para establecer manualmente los valores de compensación, cree un diagrama de puntos para el anticuerpo conjugado con fluorocromo dado según corresponda [es decir, para establecer la compensación para un anticuerpo conjugado con fluoresceína (FITC), use un diagrama de puntos FL1 vs. FL2]. 15. Coloque una puerta de cuadrante de manera que la población de microesferas negativas esté en el cuadrante inferior izquierdo y la población de microesferas positivas esté en el cuadrante superior o inferior derecho, y ajuste los valores de compensación hasta que la intensidad de fluorescencia media (MFI) de cada población (como se muestra en la ventana de estadísticas del cuadrante) sea aproximadamente igual (es decir, para FL2 -%FL1, la MFI de FL2 de ambas poblaciones de microesferas debe ser aproximadamente igual cuando se compensa correctamente). 16. Repita los pasos 14 y 15 para otros tubos, según sea necesario. 17. Proceda a adquirir el experimento de tinción real.
Avisos del producto: Cy es una marca registrada de Amersham Biosciences Limited. Todas las proteínas séricas provienen de mataderos inspeccionados por el USDA ubicados en Estados Unidos. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico, altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para consultar los protocolos técnicos.
Descripción: Cantidad/Tamaño: Número de pieza: ID de EntrezGene
N/D : 6.0 : N/D : N/D