BD, 560547, BD Pharmingen™ APC-Cy™7 Anti-IL-2 de ratón

Nombre alternativo: Il2; Interleucina-2; Factor de crecimiento de células T; TCGF
Reactividad: Ratón (Prueba de control de calidad)
Isotipo: IgG2b de rata
Inmunógeno: proteína recombinante IL-2 de ratón
Aplicación: Tinción intracelular (citometría de flujo) (Probado rutinariamente)
Concentración: 0,2 mg/ml
ID de registro: AB_1727544
Tampón de almacenamiento: Solución tamponada acuosa que contiene estabilizador de proteínas y ≤0,09 % de azida sódica.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: Conservar sin diluir a 4 °C y protegido de la luz. No congelar. El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad. El anticuerpo se conjugó con APC-Cy7 en condiciones óptimas, eliminándose el anticuerpo no conjugado y el APC-Cy7 libre.
Procedimientos de ensayo recomendados: Citometría de flujo: El anticuerpo JES6-5H4 es útil para la tinción inmunofluorescente y el análisis por citometría de flujo para identificar y enumerar células productoras de IL-2 en poblaciones celulares mixtas. Un control útil que los investigadores pueden considerar para demostrar la especificidad de la tinción es el prebloqueo con uno de los siguientes reactivos: (1) IL-2 recombinante de ratón (n.° de cat. 550069) o (2) anticuerpo JES6-5H4 purificado (n.° de cat. 554425), antes de la tinción. Preparación celular: Los investigadores que no deseen utilizar células MiCK-1 pueden preparar esplenocitos de ratón (p. ej., BALB/c) estimulados durante 4-6 horas con PMA (5 ng/ml, Sigma-Aldrich, n.º de cat. P-8139) e ionomicina (500 ng/ml, Sigma-Aldrich, n.º de cat. I-0634) en presencia de 1 µg/ml de brefeldina A (BD GolgiPlug™, n.º de cat. 555029). Se recomienda fijar y permeabilizar las células antes de la tinción.
Avisos del producto: Avisos del producto Dado que las aplicaciones varían, cada investigador debe titular el reactivo para obtener resultados óptimos. Se debe utilizar un control de isotipo a la misma concentración que el anticuerpo de interés. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Advertencia: Algunos conjugados APC-Cy7 y PE-Cy7 muestran cambios en su espectro de emisión con la exposición prolongada al formaldehído. Si no puede analizar las muestras fijadas en cuatro horas, le recomendamos que utilice el fijador estabilizador BD™ (n.º de cat. 338036). Tenga en cuenta las siguientes precauciones: La absorción de luz visible puede alterar significativamente la transferencia de energía que se produce en cualquier conjugado de fluorocromo en tándem; por lo tanto, recomendamos tomar precauciones especiales (como envolver los viales, tubos o gradillas en papel de aluminio) para evitar la exposición de los reactivos conjugados, incluidas las células teñidas con esos reactivos, a la iluminación ambiental. La emisión del fluorocromo en tándem APC-Cy7 se capta en un detector para longitudes de onda de fluorescencia de 750 nm o superiores. Cy es una marca registrada de GE Healthcare. APC-Cy7 es un fluorocromo en tándem compuesto de aloficocianina (APC), que se excita mediante líneas láser entre 595 y 647 nm y actúa como donante de energía, acoplado al colorante de cianina Cy7™, que actúa como aceptor de energía y fluoresce a 780 nm. BD Biosciences Pharmingen ha maximizado la transferencia de energía del fluorocromo en APC-Cy7, maximizando así la intensidad de su emisión de fluorescencia, minimizando la emisión residual de APC y minimizando la compensación electrónica requerida en sistemas de citometría de flujo multiláser-láser. Nota: Si bien se hace todo lo posible para minimizar la variación entre lotes en la emisión residual de APC, se recomienda encarecidamente analizar cada lote para detectar diferencias en la compensación requerida y realizar controles de compensación individuales para cada conjugado APC-Cy7. Para obtener información sobre los espectros de fluorocromos y la configuración adecuada del instrumento, consulte nuestra página web sobre citometría de flujo multicolor en www.bdbiosciences.com/colors. Para consultar los protocolos técnicos, visite www.bdbiosciences.com/us/s/resources.