BD, 560640, BD Pharmingen™ Alexa Fluor® 700 Ratón Anti-PARP Escindido (Asp 214)

Reactividad: Humana (Pruebas de control de calidad)
Isotipo: IgG1 de ratón, κ
Inmunógeno: PARP humana escindida
Aplicación: Tinción intracelular (citometría de flujo) (Probado rutinariamente)
Vol. por prueba: 5 µl
ID de registro: AB_1727571
Tampón de almacenamiento: Solución tamponada acuosa que contiene estabilizador de proteínas y ≤0,09 % de azida sódica.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: Conservar sin diluir a 4 °C y protegido de la luz. No congelar. El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad. El anticuerpo se conjugó con Alexa Fluor® 700 en condiciones óptimas y se eliminó el Alexa Fluor® 700 que no reaccionó.
Procedimientos de ensayo recomendados: Procedimientos de ensayo recomendados Citometría de flujo: La camptotecina, un extracto del árbol chino Camptotheca acuminata, es un potente inhibidor de la topoisomerasa I, una molécula necesaria para la síntesis de ADN. Se ha informado que la camptotecina induce la apoptosis de manera dependiente de la dosis in vitro. Materiales · Prepare una solución madre de camptotecina 1,0 mM (Sigma-Aldrich; N.º de cat. C-9911) en DMSO. · Línea celular Jurkat (ATCC TIB-152), proliferante, a 1 x 10^6 células/ml. · Kit de fijación/permeabilización BD Cytofix/Cytoperm™ (N.º de cat. 554714) o solución Cytofix/Cytoperm™ (N.º de cat. 554722) más tampón Perm/Wash™ (N.º de cat. 554723). Procedimiento 1. Añadir camptotecina (concentración final de 4-6 µM) por cada 10^6 células Jurkat en proliferación. Si se desea, también se puede preparar una alícuota de control de células sin tratar. 2. Incubar las células durante 4-6 horas a 37 °C. 3. Lavar las células (las alícuotas tratadas con camptotecina y las de control) dos veces con PBS frío; a continuación, resuspenderlas en solución BD Cytofix/Cytoperm™ a una concentración de 2 x 10^6 células/ml. 4. Incubar las células durante 20 minutos en hielo. 5. Sedimentar las células, aspirar y desechar la solución Cytofix/Cytoperm™. 6. Lavar las células dos veces a temperatura ambiente con 0,5 ml de tampón Perm/Wash™ por cada 10^6 células y desechar los sobrenadantes. 7. Resuspenda las células en el tampón Perm/Wash™ a 10 x 10^6 /ml. 8. Divida las muestras de prueba en alícuotas de 1 x 10^6 células por cada 100 µl de prueba. 9. Añada 5 µl de anticuerpo por prueba e incube durante 30 minutos a temperatura ambiente. 10. Lave cada prueba en 1,0 ml del tampón Perm/Wash™ y deseche el sobrenadante. 11. Resuspenda cada prueba en 0,5 ml del tampón Perm/Wash™ y analice mediante citometría de flujo.
Avisos del producto: Avisos del producto Este reactivo ha sido prediluido para su uso al volumen recomendado por prueba. Normalmente usamos 1 × 10^6 células en una muestra experimental de 100 µl (una prueba). Se debe usar un control de isotipo a la misma concentración que el anticuerpo de interés. Alexa Fluor® 700 tiene un máximo de adsorción de ~700 nm y una emisión de fluorescencia máxima de ~720 nm. Antes de teñir las células con este reactivo, confirme que su citómetro de flujo es capaz de excitar el fluorocromo y discriminar la fluorescencia resultante. Alexa Fluor® es una marca registrada de Molecular Probes, Inc., Eugene, OR. Los conjugados de anticuerpos colorantes Alexa Fluor®, Pacific Blue™ y Cascade Blue® en este producto se venden bajo licencia de Molecular Probes, Inc. solo para uso en investigación, excluyendo el uso en combinación con microarrays o como reactivos específicos de analito. Los colorantes Alexa Fluor® (excepto Alexa Fluor® 430), Pacific Blue™ y Cascade Blue® están cubiertos por patentes en trámite y emitidas. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico, altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Para obtener información sobre los espectros de fluorocromos y la configuración adecuada del instrumento, consulte nuestra página web de Citometría de Flujo Multicolor en www.bdbiosciences.com/colors. Consulte los protocolos técnicos en www.bdbiosciences.com/us/s/resources.