BD, 560922, BD Pharmingen™ PE-Cy™7 Rata Anti-CCR7 Humano (CD197)

Nombre alternativo: CCR7, BLR-2, EBI-1, CMKBR7
Reactividad: Humana (Pruebas de control de calidad)
Isotipo: IgG2a de rata, κ
Inmunógeno: proteína CCR7 humana
Aplicación: Citometría de flujo (probada rutinariamente)
Vol. por prueba: 5 µl
ID de registro: AB_396765
Tampón de almacenamiento: Solución tamponada acuosa que contiene BSA y ≤0,09 % de azida sódica.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: Conservar sin diluir a 4 °C y protegido de la luz. No congelar. El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad. El anticuerpo se conjugó con PE-Cy7 en condiciones óptimas, eliminándose el anticuerpo no conjugado y el PE-Cy7 libre.
Procedimientos de ensayo recomendados: Procedimientos de ensayo recomendados El anticuerpo 3D12 purificado, conjugado con PE, biotina y PE-Cy7 (n.º de cat. 552175, 552176, 552174 y 557648) se puede utilizar para la tinción inmunofluorescente y los análisis de citometría de flujo de leucocitos humanos y líneas celulares que expresan CCR7. Recomendación: Se sabe que los receptores de quimiocinas se internalizan durante la manipulación, lo que resulta en una expresión de baja frecuencia. Los estudios de inmunofenotipado de los receptores de quimiocinas deben realizarse en sangre completa recién extraída (<24 horas). La incubación con el anticuerpo debe realizarse a 4 °C en la oscuridad. Se ha demostrado que la manipulación celular, como la separación con Ficoll, la congelación o la exposición a bajas temperaturas antes de la tinción, causa una disminución en la intensidad de la tinción y resultados inconsistentes. Se recomienda encarecidamente un procedimiento de tinción de varios pasos para amplificar las señales inmunofluorescentes en el análisis de la expresión de CCR7 humano mediante citometría de flujo. Se recomienda el anti-CCR7 humano purificado (n.° de cat. 552175) y un procedimiento de tinción de tres pasos para detectar la expresión de baja frecuencia.
Avisos del producto: Avisos del producto Este reactivo ha sido prediluido para su uso al volumen recomendado por prueba. Normalmente usamos 1 × 10^6 células en una muestra experimental de 100 µl (una prueba). Para los espectros de fluorocromo y la configuración adecuada del instrumento, consulte nuestra página web de citometría de flujo multicolor en www.bdbiosciences.com/colors. PE-Cy7 es un fluorocromo en tándem compuesto de R-ficoeritrina (PE), que se excita con luz de 488 nm y sirve como donante de energía, acoplado al colorante de cianina Cy7, que actúa como aceptor de energía y fluoresce máximamente a 780 nm. La emisión del fluorocromo en tándem PE-Cy7 se recoge en un detector para longitudes de onda de fluorescencia de 750 nm y superiores. Aunque se hace todo lo posible para minimizar la variación entre lotes en la eficiencia de la transferencia de energía del fluorocromo, se pueden observar diferencias en la emisión residual de PE. Por lo tanto, recomendamos realizar controles de compensación individuales para cada conjugado de PE-Cy7. El PE-Cy7 está optimizado para su uso con un único láser de iones de argón que emite luz de 488 nm, y no existe una superposición significativa entre los espectros de emisión de PE-Cy7 y FITC. Al utilizar citómetros de doble láser, que pueden excitar directamente tanto el PE como el Cy7, recomendamos utilizar la compensación de haz cruzado durante la adquisición de datos o la compensación de software durante el análisis de datos. Tenga en cuenta las siguientes precauciones: La absorción de luz visible puede alterar significativamente la transferencia de energía que se produce en cualquier conjugado de fluorocromo en tándem; por lo tanto, recomendamos tomar precauciones especiales (como envolver los viales, tubos o gradillas en papel de aluminio) para evitar la exposición de los reactivos conjugados, incluidas las células teñidas con dichos reactivos, a la iluminación ambiental. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico, altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Todas las proteínas séricas provienen de mataderos inspeccionados por el USDA ubicados en Estados Unidos. Advertencia: Algunos conjugados APC-Cy7 y PE-Cy7 muestran cambios en su espectro de emisión con la exposición prolongada al formaldehído. Si no puede analizar las muestras fijadas en cuatro horas, le recomendamos utilizar el fijador estabilizador BD™ (n.° de cat. 338036). Cy es una marca registrada de GE Healthcare. Consulte los protocolos técnicos en www.bdbiosciences.com/us/s/resources.