BD, 560923, BD Pharmingen™ PE-Cy™7 Anti-TNF humano de ratón

Nombre alternativo: Factor de necrosis tumoral alfa; TNF-a; TNF-α; TNFSF2; caquectina
Reactividad: Humano (prueba de control de calidad), Rhesus, Cynomolgus, Babuino (probado en desarrollo)
Isotipo: IgG1 de ratón, κ
Inmunógeno: TNF humano recombinante
Aplicación: Tinción intracelular (citometría de flujo) (probada rutinariamente), ELISA (probada durante el desarrollo)
Vol. por prueba: 5 µl
ID de registro: AB_396764
Tampón de almacenamiento: Solución tamponada acuosa que contiene BSA y ≤0,09 % de azida sódica.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: Conservar sin diluir a 4 °C y protegido de la luz. No congelar. El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad. El anticuerpo se conjugó con PE-Cy7 en condiciones óptimas, eliminándose el anticuerpo no conjugado y el PE-Cy7 libre.
Procedimientos de ensayo recomendados: Tinción inmunofluorescente y análisis de citometría de flujo: El anticuerpo MAb11 es útil para la tinción inmunofluorescente intracelular y el análisis de citometría de flujo para identificar y enumerar células productoras de TNF en poblaciones celulares mixtas. Los anticuerpos MAb11 conjugados con FITC, PE, APC y PE-Cy7 (n.º de cat. 554512, 554513, 554514 y 557647, respectivamente) son especialmente adecuados para estos estudios (véase la imagen). Para una tinción inmunofluorescente óptima con análisis de citometría de flujo, este anticuerpo anticitocina debe utilizarse a 5 µl/prueba. La técnica de tinción y el uso de controles de bloqueo se describen en detalle por C. Prussin y D. Metcalfe.3 Para la metodología específica, visite nuestro sitio web, http://www.bdbiosciences.com/us/s/resources, y vaya a la sección de protocolos en "Citocinas (tinción intracelular)" o "Flujo intracelular". Detección ELISA: El anticuerpo MAb11 biotinilado (n.º de cat. 554511) puede utilizarse como anticuerpo de detección en un ELISA tipo sándwich para medir los niveles de proteína TNF humana junto con el clon MAb1 (n.º de cat. 551220; anti-TNF humano de ratón purificado) como anticuerpo de captura y el TNF humano recombinante (n.º de cat. 554618) como estándar. Para conocer la metodología específica, visite la sección de protocolos en "ELISA y ELISPOT" en nuestro sitio web, http://www.bdbiosciences.com/us/s/resources.
Avisos del producto: Avisos del producto Este reactivo ha sido prediluido para su uso en el volumen recomendado por prueba. Normalmente usamos 1 × 10^6 células en una muestra experimental de 100 µl (una prueba). Se debe usar un control de isotipo a la misma concentración que el anticuerpo de interés. La fuente de todas las proteínas séricas proviene de mataderos inspeccionados por el USDA ubicados en los Estados Unidos. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. PE-Cy7 es un fluorocromo en tándem compuesto de R-ficoeritrina (PE), que se excita con luz de 488 nm y sirve como donante de energía, acoplado al colorante de cianina Cy7, que actúa como aceptor de energía y fluoresce máximamente a 780 nm. La emisión del fluorocromo en tándem PE-Cy7 se recoge en un detector para longitudes de onda de fluorescencia de 750 nm y superiores. Aunque se hace todo lo posible para minimizar la variación entre lotes en la eficiencia de la transferencia de energía del fluorocromo, pueden observarse diferencias en la emisión residual del PE. Por lo tanto, recomendamos que se realicen controles de compensación individuales para cada conjugado de PE-Cy7. El PE-Cy7 está optimizado para su uso con un único láser de iones de argón que emite luz de 488 nm, y no hay una superposición significativa entre los espectros de emisión de PE-Cy7 y FITC. Cuando se utilizan citómetros de láser dual, que pueden excitar directamente tanto el PE como el Cy7, recomendamos el uso de compensación de haz cruzado durante la adquisición de datos o compensación de software durante el análisis de datos. Tenga en cuenta las siguientes precauciones: La absorción de luz visible puede alterar significativamente la transferencia de energía que ocurre en cualquier conjugado de fluorocromo en tándem; Por lo tanto, recomendamos tomar precauciones especiales (como envolver los viales, tubos o gradillas en papel de aluminio) para evitar la exposición de los reactivos conjugados, incluidas las células teñidas con dichos reactivos, a la iluminación ambiental. Advertencia: Algunos conjugados APC-Cy7 y PE-Cy7 muestran cambios en su espectro de emisión con la exposición prolongada al formaldehído. Si no puede analizar las muestras fijadas en cuatro horas, le recomendamos que utilice el fijador estabilizador BD™ (n.º de cat. 338036). Para conocer los espectros de fluorocromo y la configuración adecuada del instrumento, consulte nuestra página web de citometría de flujo multicolor en www.bdbiosciences.com/colors. Cy es una marca registrada de GE Healthcare. Es posible que la reactividad cruzada de especies detectada durante el desarrollo del producto no se haya confirmado en todos los formatos o aplicaciones. Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para obtener información sobre los protocolos técnicos.