BD, 561041, BD Pharmingen™ PE-Cy™7 Rata Anti-TNF de Ratón

Reactividad: Ratón (Prueba de control de calidad)
Isotipo: IgG1 de rata
Inmunógeno: TNF de ratón recombinante
Aplicación: Tinción intracelular (citometría de flujo) (Probado rutinariamente)
Concentración: 0,2 mg/ml
ID de registro: AB_396761
Tampón de almacenamiento: Solución tamponada acuosa que contiene ≤0,09 % de azida sódica.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad. El anticuerpo se conjugó con PE-Cy7 en condiciones óptimas, eliminándose el anticuerpo no conjugado y la PE-Cy7 libre. Conservar sin diluir a 4 °C y protegido de la luz. No congelar.
Procedimientos de ensayo recomendados: El anticuerpo MP6-XT22 conjugado con PE-Cy7 (n.° de cat. 557644) está disponible para tinción inmunofluorescente multicolor y análisis por citometría de flujo para identificar y enumerar células productoras de TNF en poblaciones celulares mixtas (véase la figura). Para una tinción inmunofluorescente óptima mediante citometría de flujo, este anticuerpo anticitocina debe titularse (≤ 0,5 µg de mAb/millón de células). Para consultar la metodología específica, consulte la sección de protocolos o el capítulo sobre tinción intracelular para citometría de flujo en el Manual de Función Inmunitaria, ambos disponibles en nuestro sitio web: www.bdbiosciences.com. Un control útil para demostrar la especificidad de la tinción es uno de los siguientes: 1) prebloquear el anticuerpo MP6-XT22 conjugado con un exceso molar de ligando (p. ej., TNF murino recombinante; n.º de cat. 554589) antes de la tinción, o 2) prebloquear las células fijadas/permeabilizadas con el anticuerpo MP6-XT22 no marcado (n.º de cat. 554416) antes de la tinción. La técnica de tinción y los controles de bloqueo se describen en detalle en C. Prussin y D. Metcalfe. Un control de isotipo de IgG1 de rata adecuado para evaluar el nivel de tinción de fondo en células de ratón y humanas fijadas con paraformaldehído/permeabilizadas con saponina es PE-Cy7-R3-34 (n.º de cat. 557645). Utilice controles de isotipo en concentraciones comparables al anticuerpo de interés.
Avisos del producto: Avisos del producto Dado que las aplicaciones varían, cada investigador debe titular el reactivo para obtener resultados óptimos. Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para obtener los protocolos técnicos. Para los espectros de fluorocromo y la configuración adecuada del instrumento, consulte nuestra página web de Citometría de flujo multicolor en www.bdbiosciences.com/colors. PE-Cy7 es un fluorocromo en tándem compuesto de R-ficoeritrina (PE), que se excita con luz de 488 nm y sirve como donante de energía, acoplado al colorante de cianina Cy7, que actúa como aceptor de energía y fluoresce máximamente a 780 nm. La emisión del fluorocromo en tándem PE-Cy7 se recoge en un detector para longitudes de onda de fluorescencia de 750 nm y superiores. Aunque se hace todo lo posible para minimizar la variación entre lotes en la eficiencia de la transferencia de energía del fluorocromo, se pueden observar diferencias en la emisión residual de PE. Por lo tanto, recomendamos que se realicen controles de compensación individuales para cada conjugado PE-Cy7. PE-Cy7 está optimizado para su uso con un solo láser de iones de argón que emite luz de 488 nm, y no hay una superposición significativa entre los espectros de emisión de PE-Cy7 y FITC. Cuando se utilizan citómetros de láser dual, que pueden excitar directamente tanto PE como Cy7, recomendamos el uso de compensación de haz cruzado durante la adquisición de datos o compensación de software durante el análisis de datos. Advertencia: Algunos conjugados APC-Cy7 y PE-Cy7 muestran cambios en su espectro de emisión con la exposición prolongada al formaldehído. Si no puede analizar las muestras fijadas en cuatro horas, le recomendamos que utilice el fijador estabilizador BD™ (n.º de cat. 338036). Tenga en cuenta las siguientes precauciones: La absorción de luz visible puede alterar significativamente la transferencia de energía que se produce en cualquier conjugado de fluorocromo en tándem; Por lo tanto, recomendamos tomar precauciones especiales (como envolver los viales, tubos o gradillas en papel de aluminio) para evitar la exposición de los reactivos conjugados, incluidas las células teñidas con dichos reactivos, a la iluminación ambiental. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Cy es una marca registrada de Amersham Biosciences Limited. Este producto conjugado se vende bajo licencia de las siguientes patentes: Patentes estadounidenses n.º 5.486.616; 5.569.587; 5.569.766; 5.627.027. Este producto está sujeto a los derechos de propiedad de Amersham Biosciences Corp. y la Universidad Carnegie Mellon, y se fabrica y vende bajo licencia de Amersham Biosciences Corp. Este producto tiene licencia de venta únicamente para investigación. No tiene licencia para ningún otro uso. Si necesita una licencia comercial para usar este producto y no la tiene, devuelva este material sin abrir a BD Biosciences, 10975 Torreyana Rd, San Diego, CA 92121 y se le reembolsará cualquier dinero pagado por el material.