BD, 561184, BD Pharmingen™ Alexa Fluor® 647 Ratón anti-FoxP3 humano

Nombre alternativo: proteína de caja Forkhead P3; Scurfin; AIID; IPEX; JM2; DIETER; PIDX; XPID
Reactividad: Humana (Pruebas de control de calidad)
Isotipo: Ratón BALB/c IgG1, κ
Inmunógeno: proteína recombinante FoxP3 humana de longitud completa
Aplicación: Tinción intracelular (citometría de flujo) (Probado rutinariamente)
Vol. por prueba: 5 µl
ID de registro: AB_10584328
Tampón de almacenamiento: Solución tamponada acuosa que contiene BSA y ≤0,09 % de azida sódica.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad. El anticuerpo se conjugó con Alexa Fluor® 647 en condiciones óptimas y se eliminó el Alexa Fluor® 647 no reaccionado. Conservar sin diluir a 4 °C y protegido de la exposición prolongada a la luz. No congelar.
Procedimientos de ensayo recomendados: Procedimientos de ensayo recomendados Preparación celular y procedimientos de tinción para el anticuerpo anti-FoxP3 humano conjugado con fluorocromo 1. Deje los tampones a temperatura ambiente (TA) antes de usar. Prepare soluciones de trabajo del juego de tampones BD Pharmingen Human FoxP3, n.º de cat. 560098 (para la preparación del tampón, consulte la hoja de datos técnicos del n.º de cat. 560098, instrucciones del tampón para obtener más información). 2. Prepare PBMC humanas. Suspenda las células con tampón de tinción BD Pharmingen™ (FBS)* a diez millones de células/ml. 3. Pipetee la cantidad apropiada de reactivo de tinción de superficie en el fondo de cada tubo de 12 x 75 mm. 4. Añada 100 µl de células por tubo, agite en vórtex e incube durante 20 minutos a TA protegido de la luz. 5. Añada 2 ml de tampón de lavado. Centrifugue a 250 xg durante 10 minutos para sedimentar las células y eliminar el tampón de lavado. 6. Para fijar las células, resuspenda suavemente el sedimento celular en el volumen residual del tampón de lavado y luego agregue 2 ml de tampón A 1x Human FoxP3. Agite en vórtex. Incube durante 10 minutos a temperatura ambiente en oscuridad. 7. Centrifugue a 500 xg durante 5 minutos y elimine el fijador. Precaución: Tenga en cuenta que el sedimento flota. 8. Para lavar las células, resuspenda cada sedimento celular en 2 ml de tampón de tinción BD Pharmingen (FBS)* y centrifugue a 500 xg durante 5 minutos. Elimine el tampón de lavado. 9. Para permeabilizar las células, resuspenda suavemente el sedimento en el volumen residual del tampón de lavado y luego agregue 0,5 ml de solución de trabajo 1x Human FoxP3 Buffer C a cada tubo. Agite en vórtex. Incube durante 30 minutos a temperatura ambiente protegido de la luz. 10. Para lavar las células, añadir 2 ml de tampón de tinción BD Pharmingen (FBS)* a cada tubo, centrifugar a 500 xg durante 5 minutos a temperatura ambiente. Retirar el tampón y repetir el paso de lavado. Retirar el tampón. 11. Añadir el anticuerpo FoxP3 conjugado a las concentraciones adecuadas para resuspender el pellet. Agitar suavemente o mezclar con vórtex. 12. Incubar durante 30 minutos en oscuridad a temperatura ambiente. 13. Repetir el paso de lavado n.º 10. 14. Resuspender en el tampón de lavado y analizar inmediatamente. Opcional: añadir 300 µl de formaldehído al 1 % en PBS 1× y almacenar a 4 °C. Analizar las células en un plazo de 24 horas. * Recomendamos utilizar el tampón de tinción BD Pharmingen™ (FBS; n.º de cat. 554656) para todos los pasos de lavado y cubrir los tubos durante los pasos de incubación con tapas o parafilm. También recomendamos optimizar los voltajes de dispersión frontal y lateral para visualizar los linfocitos separados de los desechos, los fantasmas de glóbulos rojos y/o las plaquetas antes de la adquisición.
Avisos del producto: Avisos del producto Este reactivo ha sido prediluido para su uso al volumen recomendado por prueba. Normalmente usamos 1 × 10^6 células en una muestra experimental de 100 µl (una prueba). Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para obtener los protocolos técnicos. Para los espectros de fluorocromo y la configuración adecuada del instrumento, consulte nuestra página web de citometría de flujo multicolor en www.bdbiosciences.com/colors. Los conjugados de anticuerpos de colorante Alexa Fluor®, Pacific Blue™ y Cascade Blue® en este producto se venden bajo licencia de Molecular Probes, Inc. solo para uso en investigación, excluyendo el uso en combinación con microarrays o como reactivos específicos de analito. Los colorantes Alexa Fluor® (excepto Alexa Fluor® 430), el colorante Pacific Blue™ y el colorante Cascade Blue® están cubiertos por patentes pendientes y emitidas. La emisión de fluorocromo Alexa Fluor® 647 se obtiene con la misma configuración del instrumento que para la aloficocianina (APC). Alexa Fluor® es una marca registrada de Molecular Probes, Inc., Eugene, OR. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico, altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Todas las proteínas séricas provienen de mataderos inspeccionados por el USDA ubicados en Estados Unidos.