BD, 561493, BD Pharmingen™ PerCP-Cy™5.5 Anti-FoxP3 humano de ratón

Nombre alternativo: proteína de caja Forkhead P3; Scurfin; AIID; IPEX; JM2; DIETER; PIDX; XPID
Reactividad: Humana (Pruebas de control de calidad)
Isotipo: Ratón BALB/c IgG1, κ
Inmunógeno: proteína recombinante FoxP3 humana de longitud completa
Aplicación: Tinción intracelular (citometría de flujo) (Probado rutinariamente)
Vol. por prueba: 5 µl
ID de registro: AB_10714077
Tampón de almacenamiento: Solución tamponada acuosa que contiene BSA y ≤0,09 % de azida sódica.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: Conservar sin diluir a 4 °C y protegido de la luz. No congelar. El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad. El anticuerpo se conjugó con PerCP-Cy5.5 en condiciones óptimas, eliminándose tanto el anticuerpo no conjugado como el PerCP-Cy5.5 libre. No se recomienda almacenar los conjugados de PerCP-Cy5.5 en un diluyente no optimizado, ya que podría producirse una pérdida de intensidad de la señal.
Procedimientos de ensayo recomendados: Procedimientos de ensayo recomendados Preparación celular y procedimientos de tinción para el anticuerpo anti-FoxP3 humano conjugado con fluorocromo 1. Deje los tampones a temperatura ambiente (TA) antes de usar. Prepare soluciones de trabajo del juego de tampones BD Pharmingen Human FoxP3, n.º de cat. 560098 (para la preparación del tampón, consulte la hoja de datos técnicos del n.º de cat. 560098, instrucciones del tampón para obtener más información). 2. Prepare PBMC humanas. Suspenda las células con tampón de tinción BD Pharmingen™ (FBS)* a diez millones de células/ml. 3. Pipetee la cantidad apropiada de reactivo de tinción de superficie en el fondo de cada tubo de 12 × 75 mm. 4. Añada 100 µl de células por tubo, agite en vórtex e incube durante 20 minutos a TA protegido de la luz. 5. Añada 2 ml de tampón de lavado. Centrifugue 250 g durante 10 minutos para sedimentar las células y eliminar el tampón de lavado. 6. Para fijar las células, resuspenda suavemente el sedimento celular en el volumen residual del tampón de lavado y luego agregue 2 ml de tampón A 1× Human FoxP3. Agite en vórtex. Incube durante 10 minutos a temperatura ambiente en oscuridad. 7. Centrifugue 500 g durante 5 minutos y elimine el fijador. Precaución: Tenga en cuenta que el sedimento flota. 8. Para lavar las células, resuspenda cada sedimento celular en 2 ml de tampón de tinción BD Pharmingen (FBS)* y centrifugue 500 g durante 5 minutos. Elimine el tampón de lavado. 9. Para permeabilizar las células, resuspenda suavemente el sedimento en el volumen residual del tampón de lavado y luego agregue 0,5 ml de solución de trabajo 1× Human FoxP3 Buffer C a cada tubo. Agite en vórtex. Incube durante 30 minutos a temperatura ambiente protegido de la luz. 10. Para lavar las células, añadir 2 ml de tampón de tinción BD Pharmingen™ (FBS)* a cada tubo, centrifugar 500 g durante 5 minutos a temperatura ambiente. Retirar el tampón y repetir el paso de lavado. Retirar el tampón. 11. Añadir el anticuerpo conjugado FoxP3 en las concentraciones adecuadas para resuspender el pellet. Agitar suavemente o mezclar con vórtex. 12. Incubar durante 30 minutos en oscuridad a temperatura ambiente. 13. Repetir el paso de lavado n.º 10. 14. Resuspender en el tampón de lavado y analizar inmediatamente. Opcional: añadir 300 µl de formaldehído al 1 % en PBS 1× y almacenar a 4 °C. Analizar las células en un plazo de 24 horas. * Recomendamos utilizar el tampón de tinción BD Pharmingen™ (FBS; n.º de cat. 554656) para todos los pasos de lavado y cubrir los tubos durante los pasos de incubación con tapas o parafilm. También recomendamos optimizar los voltajes de dispersión frontal y lateral para visualizar los linfocitos separados de los desechos, los fantasmas de glóbulos rojos y/o las plaquetas antes de la adquisición.
Avisos del producto: Avisos del producto Este reactivo ha sido prediluido para su uso al volumen recomendado por prueba. Normalmente usamos 1 × 10^6 células en una muestra experimental de 100 µl (una prueba). La fuente de todas las proteínas séricas proviene de mataderos inspeccionados por el USDA ubicados en los Estados Unidos. Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para conocer los protocolos técnicos. Cy es una marca registrada de Amersham Biosciences Limited. Este producto conjugado se vende bajo licencia de las siguientes patentes: Patentes de EE. UU. n.º 5.486.616; 5.569.587; 5.569.766; 5.627.027. Observe las siguientes precauciones: La absorción de luz visible puede alterar significativamente la transferencia de energía que ocurre en cualquier conjugado de fluorocromo en tándem; Por lo tanto, recomendamos tomar precauciones especiales (como envolver viales, tubos o gradillas en papel de aluminio) para evitar la exposición de los reactivos conjugados, incluidas las células teñidas con dichos reactivos, a la iluminación ambiental. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Los anticuerpos marcados con PerCP-Cy5.5 se pueden usar con reactivos marcados con FITC y R-PE en citómetros de flujo de láser único sin superposición espectral significativa de la fluorescencia de PerCP-Cy5.5, FITC y R-PE. PerCP-Cy5.5 está optimizado para su uso con un solo láser de iones de argón que emite luz de 488 nm. Debido al amplio espectro de absorción del fluorocromo en tándem, se debe tener especial cuidado al usar citómetros de láser dual, que pueden excitar directamente tanto PerCP como Cy5.5™. Recomendamos el uso de compensación de haz cruzado durante la adquisición de datos o compensación de software durante el análisis de datos. Para obtener información sobre espectros de fluorocromos y la configuración adecuada del instrumento, consulte nuestra página web de Citometría de Flujo Multicolor en www.bdbiosciences.com/colors. Este producto está sujeto a los derechos de propiedad de Amersham Biosciences Corp. y la Universidad Carnegie Mellon, y se fabrica y vende bajo licencia de Amersham Biosciences Corp. Este producto tiene licencia de venta únicamente para investigación. No está autorizado para ningún otro uso. Si necesita una licencia comercial para usar este producto y no la tiene, devuelva este material sin abrir a BD Biosciences, 10975 Torreyana Rd, San Diego, CA 92121, y se le reembolsará el importe pagado por el material.