BD, 561908, Solución BD Pharmingen™ Hoechst 33342

Preparación y almacenamiento: Conservar sin diluir a 4 °C y protegido de la luz. No congelar.
Procedimientos de ensayo recomendados: Procedimientos de ensayo recomendados Tinción inmunofluorescente de células vivas para visualización nuclear 1. Diluya la solución Hoechst 33342 a 5 - 10 μg/mL en medio completo inmediatamente antes de usar. 2. Agregue la solución Hoechst 33342 a cada muestra e incube a 37 °C durante 30 - 60 minutos. El tiempo de tinción requerido depende del tipo de célula. 3. Retire la solución Hoechst de las células al final del período de incubación y agregue BD Pharmingen™ Stain Buffer (FBS) (Cat. No. 554656) o 1× PBS. Las células también se pueden analizar sin lavar, pero esto puede aumentar el fondo del tinte no unido. 4. Proceda a la obtención de imágenes. Tinción inmunofluorescente de células fijadas para visualización nuclear 1. Fije y permeabilice las células como desee. 2. Diluya la solución de Hoechst 33342 a 2 µg/ml en PBS 1× inmediatamente antes de usar. 3. Añada 2 ug/ml de solución de Hoechst 33342 a cada muestra al menos 15 minutos antes del análisis. 4. Proceda a la obtención de imágenes. Tinción de células vivas para análisis de contenido de ADN por citometría de flujo 1. Obtenga una suspensión de células individuales. 2. Resuspenda las células a 1x10^6 células/mL o menos en un medio completo que contenga 5 - 10 μg/mL de Hoechst 33342. Nota: Alternativamente, se puede añadir Hoechst 33342 directamente al medio de cultivo sin sedimentar si la densidad celular del cultivo no supera 1x10^6 células/mL. 3. Incube a 37 °C durante 30 - 60 minutos. a. La densidad celular óptima, la concentración de Hoechst 33342 y el tiempo de tinción para el análisis del contenido de ADN pueden variar según el tipo celular. Para obtener los mejores resultados, se deben optimizar las condiciones del ensayo en las primeras etapas del experimento. 4. Sedimente las células mediante centrifugación y aspire el medio con Hoechst 33342. 5. Resuspenda las células en tampón de tinción BD Pharmingen™ (FBS) o PBS 1× y proceda al análisis por citometría de flujo. Tinción de células fijadas para el análisis del contenido de ADN por citometría de flujo: 1. Obtenga una suspensión celular única. 2. Trate las células en hielo durante 30 minutos con etanol helado al 70-80 %. a. La fijación con etanol suele proporcionar los histogramas con mayor resolución. Sin embargo, este reactivo también se ha utilizado con éxito para el análisis del contenido de ADN con el protocolo Transcription Factor Buffer Set (Cat. No. 562574) o BD Cytofix™ Fixation Buffer (Cat. No. 554655) y BD Phosflow™ Perm III (Cat. No. 558050). 3. Lave las células una vez con BD Pharmingen™ Stain Buffer (FBS). 4. Diluya la solución Hoechst 33342 a 1-5 μg/mL en BD Pharmingen™ Stain Buffer (FBS) o 1× PBS inmediatamente antes de usar. 5. Tiña las células durante 15 minutos a una densidad celular de 1x10^6 células/mL. No es necesario lavar antes del análisis. a. La densidad celular y la concentración óptimas de Hoechst 33342 para el análisis del contenido de ADN pueden variar según el tipo de célula. Para obtener los mejores resultados, se deben optimizar las condiciones del ensayo en los primeros experimentos. 6. Proceda al análisis por citometría de flujo. Este producto también está disponible como componente del kit de ciclo celular (n.° de cat. 558662). Consulte la ficha técnica del kit para obtener un protocolo detallado para el uso del colorante Hoechst 333342 junto con la tinción inmunofluorescente de células en placa.
Avisos del producto: Consulte los protocolos técnicos en www.bdbiosciences.com/us/s/resources. Este anticuerpo ha sido desarrollado y certificado para aplicaciones de bioimagen. Sin embargo, no se realiza una prueba de bioimagen de rutina en todos los lotes. Se recomienda a los investigadores titular el reactivo para obtener un rendimiento óptimo. Dado que las aplicaciones varían, cada investigador debe titular el reactivo para obtener resultados óptimos. Alexa Fluor® es una marca registrada de Molecular Probes, Inc., Eugene, OR. FlowJo es una marca registrada de Tree Star Inc.