BD, 562026, BD Pharmingen™ FITC IgG1 de rata antirratón

Nombre alternativo: Ighg1; Inmunoglobulina pesada constante gamma 1; Igh-4
Reactividad: Ratón (Prueba de control de calidad)
Isotipo: LOU de rata, también conocida como Louvain, LOU/C, LOU/M IgG1, κ
Inmunógeno: IgG1 de ratón agrupada
Aplicación: Citometría de flujo (probada rutinariamente), tinción intracelular (citometría de flujo) (probada durante el desarrollo)
Concentración: 0,5 mg/ml
ID de registro: AB_10926376
Tampón de almacenamiento: Solución tamponada acuosa que contiene estabilizador de proteínas y ≤0,09 % de azida sódica.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: Conservar sin diluir a 4 °C y protegido de la luz. No congelar. El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad. El anticuerpo se conjugó con FITC en condiciones óptimas y se eliminó el FITC no reaccionado.
Procedimientos de ensayo recomendados: El anticuerpo A85-1 conjugado con FITC puede utilizarse como reactivo primario o secundario en la tinción inmunofluorescente. PROTOCOLO PARA LA TINCIÓN INMUNOFLUORESCENTE DE INMUNOGLOBULINA (Ig) INTRACELULAR: 1. Preparar una suspensión unicelular y determinar el número de células. 2. Suspender las células en tampón de tinción BD Pharmingen™ con FBS (n.° de cat. 554656) a una concentración de 2 x 10^7 células/ml y transferirlas a microplacas de fondo en U a 50 µl/pocillo para la tinción inmunofluorescente. 3. Bloquee los receptores Fcγ añadiendo 0,2 µg de anticuerpo 2.4G2 purificado (Mouse BD Fc Block™, mAb anti-CD16/CD32 de ratón purificado 2.4G2) (n.º de cat. 553141/553142) en 50 µl de tampón de tinción a cada pocillo. 4. Incube 5 minutos en hielo. 5. Añada 200 µl de tampón de tinción por pocillo y resuspenda las células. Centrifugue a 250 xg durante 5 minutos y aspire el sobrenadante. 6. Bloquee la Ig de superficie con el mAb A85-1 purificado (n.º de cat. 553440) añadiendo 1,0 µg por muestra en 50 µl de tampón de tinción por pocillo. 7. Incube 15 minutos en hielo. 8. Lave dos veces como se describe en el paso 5. 9. Resuspenda las células en 100 µl de tampón de tinción intracelular BD Cytofix/Cytoperm™ (kit BD Cytofix/Cytoperm™, n.º de cat. 554714) por pocillo. 10. Incube 30 minutos a temperatura ambiente. 11. Lave dos veces con 200 µl de tampón de lavado/permeabilización 1x (incluido en el kit BD Cytofix/Cytoperm) por pocillo. Centrifugue a 250 xg durante 5 minutos y aspire el sobrenadante entre lavados. 12. Tiña la Ig intracelular añadiendo ≤1 µg de mAb A85-1 conjugado con FITC en 50 µl de tampón de lavado/permeabilización 1x por pocillo. Nota: Se pueden añadir otros anticuerpos recomendados para la tinción de marcadores intracelulares durante este paso, como se describe en el Paso 12. 13. Incubar durante 30 minutos a temperatura ambiente. 14. Lavar dos veces como se describe en el Paso 11. 15. Resuspender y transferir las muestras en 100 µl de tampón de tinción a tubos adecuados para el análisis con un citómetro de flujo. Llenar cada tubo a 400 µl con tampón de tinción. 16. Analizar las muestras en un citómetro de flujo. Nota: Los marcadores de superficie se pueden teñir durante este paso, como se describe en la sección "Tinción inmunofluorescente de leucocitos de ratón y rata para citometría de flujo" de la sección "Protocolos técnicos" de nuestro sitio web: http://www.bdbiosciences.com/support/resources/flowcytometry/index.jsp
Avisos del producto: Dado que las aplicaciones varían, cada investigador debe titular el reactivo para obtener resultados óptimos. Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para consultar los protocolos técnicos. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico, altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Para obtener información sobre los espectros de fluorocromos y la configuración adecuada del instrumento, consulte nuestra página web sobre citometría de flujo multicolor en www.bdbiosciences.com/colors. Se debe utilizar un control de isotipo a la misma concentración que el anticuerpo de interés.