BD, 562421, BD Horizon™ PE-CF594 Anti-FoxP3 humano de ratón

Nombre alternativo: scurfin; IPEX; JM2; AIID; XPID; DIETER; PIDX
Reactividad: Humana (Pruebas de control de calidad)
Isotipo: IgG1 BALB/c de ratón
Inmunógeno: FoxP3
Aplicación: Tinción intracelular (citometría de flujo) (Probado rutinariamente)
Vol. por prueba: 5 µl
ID de registro: AB_11153143
Tampón de almacenamiento: Solución tamponada acuosa que contiene BSA y ≤0,09 % de azida sódica.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: Conservar sin diluir a 4 °C y protegido de la luz. No congelar. El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad. El anticuerpo se conjugó con BD Horizon™ PE-CF594 en condiciones óptimas, eliminándose el anticuerpo no conjugado y el PE-CF594 libre.
Procedimientos de ensayo recomendados: Procedimientos de ensayo recomendados Preparación celular y procedimientos de tinción para el anticuerpo anti-FoxP3 humano conjugado 1. Lleve los tampones a TA antes de usar. Prepare soluciones de trabajo del juego de tampones BD Pharmingen™ Human FoxP3 (n.º de cat. 560098) (para la preparación del tampón, consulte las instrucciones del tampón TDS n.º de cat. 560098 para obtener más información). 2. Prepare PBMC humanas. Diluya las células con tampón de tinción BD Pharmingen (FBS)* a 1X10^7 células/ml. 3. Pipetee la cantidad apropiada de reactivo de tinción de superficie en el fondo de cada tubo de 12 x 75 mm. 4. Añada 100 µl de células por tubo, agite en vórtex e incube durante 20 minutos a TA, protegido de la luz. 5. Añada 2 ml de tampón de lavado. Centrifugue a 250 xg durante 10 minutos y retire el tampón de lavado. 6. Para fijar las células, resuspenda suavemente el pellet celular en el volumen residual del tampón de lavado y luego agregue 2 ml de tampón A 1x Human FoxP3. Agite en vórtex. Incube durante 10 minutos a temperatura ambiente en oscuridad. 7. Centrifugue a 500 xg durante 5 minutos y retire el fijador. Precaución: Tenga en cuenta que el pellet flota. 8. Para lavar las células, resuspenda cada pellet celular en 2 ml de tampón de tinción BD Pharmingen (FBS)* y centrifugue a 500 xg durante 5 minutos. Retire el tampón de lavado. 9. Para permeabilizar las células, resuspenda suavemente el pellet celular en el volumen residual del tampón de lavado y luego agregue 0,5 ml de la solución de trabajo 1x Human FoxP3 Buffer C a cada tubo. Agite en vórtex. Incube durante 30 minutos a temperatura ambiente, protegido de la luz. 10. Para lavar las células, añadir 2 ml de tampón de tinción BD Pharmingen (FBS)* a cada tubo y centrifugar a 500 xg durante 5 minutos a temperatura ambiente. Retirar el tampón y repetir el paso de lavado. Retirar el tampón. 11. Añadir el anticuerpo conjugado FoxP3 en las concentraciones adecuadas para resuspender el pellet celular. Agitar suavemente o mezclar con vórtex. 12. Incubar durante 30 minutos en oscuridad a temperatura ambiente. 13. Repetir el paso de lavado n.º 10. 14. Resuspender en el tampón de lavado y analizar las células mediante citometría de flujo inmediatamente. Opcional: Añadir 300 µl de formaldehído al 1 % en PBS 1x y almacenar a 4 °C. Analizar las células en un plazo de 24 horas. * Se recomienda i) el uso del tampón de tinción BD Pharmingen™ (FBS; n.° de cat. 554656) en todos los pasos de lavado y la cobertura de los tubos durante los pasos de incubación con tapas o Parafilm M®, y ii) voltajes óptimos de dispersión de luz frontal y lateral para distinguir los linfocitos de los residuos, los fantasmas de glóbulos rojos y/o las plaquetas antes de la adquisición. ** Adquirir al menos entre 15 000 y 25 000 linfocitos CD4 positivos.
Avisos del producto: Avisos del producto Este reactivo ha sido prediluido para su uso al volumen recomendado por prueba. Normalmente usamos 1 × 10^6 células en una muestra experimental de 100 µl (una prueba). La fuente de todas las proteínas séricas proviene de mataderos inspeccionados por el USDA ubicados en los Estados Unidos. Se debe usar un control de isotipo a la misma concentración que el anticuerpo de interés. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Observe las siguientes precauciones: La absorción de luz visible puede alterar significativamente la transferencia de energía que ocurre en cualquier conjugado de fluorocromo en tándem; por lo tanto, recomendamos tomar precauciones especiales (como envolver viales, tubos o gradillas en papel de aluminio) para evitar la exposición de los reactivos conjugados, incluidas las células teñidas con esos reactivos, a la iluminación ambiental. Para conocer los espectros de fluorocromos y la configuración adecuada del instrumento, consulte nuestra página web de citometría de flujo multicolor en www.bdbiosciences.com/colors. Texas Red es una marca registrada de Molecular Probes, Inc., Eugene, OR. CF™ es una marca registrada de Biotium, Inc. Al ser excitado por el láser amarillo-verde (561 nm), la fluorescencia puede ser más brillante que al ser excitada por el láser azul (488 nm). Este producto se proporciona bajo un Acuerdo entre BIOTIUM y BD Biosciences. La fabricación, el uso, la venta, la oferta de venta o la importación de este producto están sujetos a una o más patentes o solicitudes pendientes de propiedad o licencia de Biotium, Inc. Este producto, y solo en la cantidad adquirida por el comprador, puede utilizarse exclusivamente para su propia investigación interna, de conformidad con la documentación adjunta del producto. No se otorga por la presente ningún otro derecho de uso, venta o transferencia de (a) este producto o (b) sus componentes de forma expresa, implícita o por impedimento legal. Este producto es solo para uso en investigación. Los usos diagnósticos requieren una licencia independiente de Biotium, Inc. Para obtener información sobre la adquisición de una licencia para este producto, incluso para fines distintos a la investigación, comuníquese con Biotium, Inc., 3159 Corporate Place, Hayward, CA 94545, Tel.: (510) 265-1027. Fax: (510) 265-1352. Correo electrónico: btinfo@biotium.com. Debido al amplio espectro de absorción del fluorocromo en tándem, se debe tener especial cuidado al utilizar citómetros multiláser, ya que pueden excitar directamente tanto el PE como el CF™594. Todas las demás marcas son marcas comerciales de sus respectivos propietarios. Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para consultar los protocolos técnicos.