BD, 562505, BD Pharmingen™ Alexa Fluor® 488 Anti-β-catenina de ratón

Nombre alternativo: CTNNB1; CTNB1; Catenina beta-1; catenina (proteína asociada a cadherina) beta 1
Reactividad: Humana (prueba de control de calidad), Ratón (probado en desarrollo)
Isotipo: IgG1 de ratón
Inmunógeno: β-catenina de ratón aa. 571-781
Aplicación: Bioimagen, inmunofluorescencia (probada rutinariamente), tinción intracelular (citometría de flujo) (probada durante el desarrollo)
Vol. por prueba: 5 µl
ID de registro: AB_11154224
Tampón de almacenamiento: solución tamponada acuosa que contiene BSA, estabilizador de proteínas y ≤0,09 % de azida sódica.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: Conservar sin diluir a 4 °C y protegido de la luz. No congelar. El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad. El anticuerpo se conjugó con Alexa Fluor® 488 en condiciones óptimas y se eliminó el Alexa Fluor® 488 que no reaccionó.
Procedimientos de ensayo recomendados: Procedimientos de ensayo recomendados Procedimiento de ensayo recomendado para bioimágenes: http://www.bdbiosciences.com/support/resources/protocols/ceritifed_reagents.jsp 1. Siembre ~10 000 células en un medio de cultivo adecuado en una placa de imágenes BD Falcon™ de 96 pocillos (n.º de cat. 353219) y cultive durante la noche. 2. Retire el medio de cultivo de los pocillos y fije las células añadiendo 100 µl de formaldehído fresco al 3,7 % en PBS o tampón de fijación BD Cytofix™ (n.º de cat. 554655) a cada pocillo e incube durante 10 minutos a temperatura ambiente (TA). 3. Retire el fijador de los pocillos y permeabilice las células utilizando metanol frío o Triton™ X-100. a. Añadir 100 μl de metanol al 90 % a -20 °C o tampón de permeación BD Phosflow™ III a -20 °C (n.º de cat. 558050) a cada pocillo e incubar (5 min, temperatura ambiente). O b. Añadir 100 µl de Triton™ X-100 al 0,1 % (Sigma-Aldrich n.º de cat. X-100) a cada pocillo e incubar (5 min, temperatura ambiente). 4. Retirar el permeabilizador de los pocillos y lavarlos dos veces con 100 μl de PBS 1×. 5. Retirar el PBS y bloquear las células añadiendo 100 μl de tampón de bloqueo, por ejemplo, tampón de tinción BD Pharmingen™ (FBS) (n.º de cat. 554656) o FBS al 3 % en PBS 1× a cada pocillo e incubar (30 min, temperatura ambiente). 6. Mientras tanto, añadir 5 ul (1 tamaño de prueba) de anticuerpos fluorescentes Bioimaging Certified en 45 ul de tampón de tinción; proteger de la luz. 7. Retirar el tampón de bloqueo y añadir 50 μl de anticuerpo fluorescente preparado por pocillo e incubar (60 min, temperatura ambiente), proteger de la luz. 8. Retirar el anticuerpo fluorescente y lavar los pocillos tres veces con 100 μl de PBS 1×. 9. Retirar el PBS y contrateñir los núcleos añadiendo 100 µl de una solución de 2 µg/ml de Hoechst 33342 (n.º de cat. 561908) en PBS 1× a cada pocillo al menos 15 minutos antes de la obtención de la imagen. 10. Visualizar y analizar las células utilizando un instrumento de imagen adecuado. Los filtros recomendados para los instrumentos BD Pathway™ son: Instrumento Excitación Emisión Dicroico BD Pathway™ 855 488/10 515 LP Fura/FITC BD Pathway™ 435 482/35 536/40 FF506
Avisos del producto: Avisos del producto Este reactivo ha sido prediluido para su uso en el volumen recomendado por prueba cuando se sigue el procedimiento de ensayo recomendado. Una prueba es típicamente ~10,000 células cultivadas en un pocillo de una placa de imágenes de 96 pocillos. Se debe usar un control de isotipo a la misma concentración que el anticuerpo de interés. La emisión del fluorocromo Alexa Fluor® 488 se recoge en la misma configuración del instrumento que para el isotiocianato de fluoresceína (FITC). Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para conocer los protocolos técnicos. Los conjugados de anticuerpos de colorante Alexa Fluor®, Pacific Blue™ y Cascade Blue® en este producto se venden bajo licencia de Molecular Probes, Inc. solo para uso en investigación, excluyendo el uso en combinación con microarrays o como reactivos específicos de analito. Los colorantes Alexa Fluor® (excepto Alexa Fluor® 430), el colorante Pacific Blue™ y el colorante Cascade Blue® están cubiertos por patentes pendientes y emitidas. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico, altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Triton es una marca registrada de Dow Chemical Company. Alexa Fluor® es una marca registrada de Molecular Probes, Inc., Eugene, OR. Todas las proteínas séricas provienen de mataderos inspeccionados por el USDA ubicados en Estados Unidos.