BD, 563755, BD Horizon™ BV711 Ratón anti-Ki-67

Nombre alternativo: MKI67; Antígeno identificado por el anticuerpo monoclonal Ki-67; KIA
Reactividad: Humana (prueba de control de calidad), Ratón (probado en desarrollo), Rata, Rhesus (reportado)
Isotipo: IgG1 de ratón, κ
Inmunógeno: Ki-67 humano
Aplicación: Tinción intracelular (citometría de flujo) (Probado rutinariamente)
Vol. por prueba: 5 µl
ID de registro: AB_2738406
Tampón de almacenamiento: Solución tamponada acuosa que contiene BSA y ≤0,09 % de azida sódica.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: Conservar sin diluir a 4 °C y protegido de la luz. No congelar. El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad. El anticuerpo se conjugó con BD Horizon™ BV711 en condiciones óptimas, eliminándose el anticuerpo no conjugado y el BD Horizon™ BV711 libre.
Procedimientos de ensayo recomendados: Se recomienda a los investigadores que utilicen el siguiente protocolo con el uso de DAPI. Se puede experimentar un mayor fondo o derrame de señal con el uso de 7-AAD o yoduro de propidio (PI). 1. Coseche, cuente y sedimente las células siguiendo los procedimientos estándar. Nota: Ki-67 se expresa en células proliferantes. El uso de células en reposo (p. ej., PBMC no estimuladas) puede dar resultados negativos. 2. Mientras agita, agregue 5 mL de etanol frío al 70% gota a gota en el sedimento celular (1-5 x 10^7 células). 3. Lave dos veces con tampón de tinción (PBS con 1% FBS, 0,09% NaN3), centrifugue durante 10 minutos a 200 x g. 4. Resuspenda las células a una concentración de 1 x 10^7 células/mL. 5. Transfiera 100 µL (1 x 10^6 células) de suspensión celular a cada tubo de muestra. 6. Añada 5 µL del anticuerpo anti-Ki-67 de ratón BV711 a los tubos correspondientes. Mezcle suavemente. 7. Incube los tubos a 4 °C durante 60 min en oscuridad. 8. Lave con 2 mL de tampón de tinción a 200 xg durante 5 minutos. 9. Aspire el sobrenadante. 10. Repita el lavado con 2 mL de tampón de tinción a 200 xg durante 5 minutos. 11. Aspire el sobrenadante. 12. Resuspenda en 350-500 µL de DAPI (n.° de cat. 564907) diluido a 1 µg/mL. 13. Proceda al análisis de citometría de flujo. Para obtener resultados óptimos y reproducibles, utilice el tampón de tinción BD Horizon Brilliant siempre que se utilicen dos o más colorantes BD Horizon Brilliant en el mismo experimento. Las interacciones de los colorantes fluorescentes pueden causar artefactos de tinción que pueden afectar la interpretación de los datos. El tampón de tinción BD Horizon Brilliant se diseñó para minimizar estas interacciones. Puede encontrar más información en la ficha técnica del tampón de tinción BD Horizon Brilliant (n.º de cat. 563794).
Avisos del producto: Avisos del producto Este reactivo ha sido prediluido para su uso al volumen recomendado por prueba. Normalmente usamos 1 × 10^6 células en una muestra experimental de 100 µl (una prueba). Se debe usar un control de isotipo a la misma concentración que el anticuerpo de interés. Es posible que la reactividad cruzada de especies detectada durante el desarrollo del producto no se haya confirmado en todos los formatos o aplicaciones. Cy es una marca comercial de GE Healthcare. Alexa Fluor® es una marca comercial registrada de Molecular Probes, Inc., Eugene, OR. BD Horizon Brilliant Violet 711 está cubierto por una o más de las siguientes patentes de EE. UU.: 8,110,673; 8,158,444; 8,227,187; 8,455,613; 8,575,303; 8,354,239. La fuente de todas las proteínas séricas proviene de mataderos inspeccionados por el USDA ubicados en Estados Unidos. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico, altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Para obtener información sobre los espectros de fluorocromos y la configuración adecuada del instrumento, consulte nuestra página web sobre citometría de flujo multicolor en www.bdbiosciences.com/colors. Para obtener información sobre los protocolos técnicos, consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources.