BD, 564406, Tinción de viabilidad reparable BD Horizon™ 510

Reactividad: Humano, Ratón (Probado en desarrollo)
Aplicación: Citometría de flujo, tinción intracelular (citometría de flujo) (probado durante el desarrollo)
ID de registro: AB_2869572
Estado regulatorio: RUO
Procedimientos de ensayo recomendados: Procedimientos de ensayo recomendados Preparación Lleve el polvo de colorante FVS510 y 260 μl de dimetilsulfóxido (DMSO; p. ej., Sigma D2650) fresco de grado de cultivo celular a temperatura ambiente. Agregue 260 μl de DMSO y agite bien la solución. Inspeccione la solución y repita el agitado hasta que el colorante madre se haya disuelto completamente. Esta es la solución madre. Almacenamiento Al llegar, almacene el colorante seco desecado y protegido de la luz a -80 °C hasta su uso. Después de la reconstitución con DMSO, almacene la solución madre a -20 °C en pequeñas alícuotas. No use el colorante reconstituido después de 90 días de almacenamiento. Deseche la solución de colorante después de 90 días posteriores a la reconstitución con DMSO. Requisitos de citometría Se pueden usar citómetros de flujo equipados con láser violeta (p. ej., BD FACSCanto™ II, BD LSRFortessa™ o BD™ LSR II). Este colorante se puede leer en filtros comúnmente usados ​​para BD Horizon™ Brilliant Violet 510, BD Horizon™ V500 o AmCyan (p. ej., 525/50). La compensación de fluorescencia se logra mejor usando una muestra de las células de interés. Procedimiento Marcaje de células con Fixable Viability Stain 510 1. Prepare las células para la tinción de citometría de flujo usando tampones sin azida sódica. 2. Lave las células una vez en solución salina tamponada con fosfato de Dulbecco (1X DPBS) sin azida sódica ni proteínas. 3. Resuspenda las células a 1x10^6 células/ml en 1X DPBS sin azida sódica ni proteínas. 4. Añada 1 μl de la solución madre BD Horizon™ Fixable Viability Stain 510 por cada 1 ml de suspensión celular (1:1000) y agite inmediatamente con vórtex. a. Nota: Recomendamos titular el colorante para un rendimiento óptimo, ya que los diferentes tipos de células y diferentes aplicaciones pueden dar lugar a un amplio grado de variabilidad en la tinción. 5. Incubar la mezcla durante 15 minutos a temperatura ambiente protegida de la luz. a. Opcional: Incubar las células y las mezclas de colorantes a 2-8 °C durante 30-60 minutos. Como alternativa, incubar las mezclas a 37 °C durante 5-7 minutos. 6. Lavar las células dos veces con 2 ml de tampón de tinción BD Pharmingen™ (FBS) (n.º de cat. 554656) o equivalente. 7. Decante el sobrenadante y mezcle suavemente para romper el sedimento celular. 8. Resuspender las células en tampón de tinción (FBS) o equivalente. 9. Teñir, fijar y permeabilizar las células como se desee para aplicaciones posteriores. Notas: 1. Cada usuario debe determinar las concentraciones óptimas de reactivos, células y condiciones para el ensayo de interés. Recomendamos titular el reactivo en experimentos tempranos para obtener resultados óptimos. 2. La reactividad del colorante libre se extingue lavando con tampón que contiene proteína (p. ej., FBS o BSA). 3. Las células pueden teñirse en masa antes de congelarlas o teñirlas con anticuerpos fluorescentes. 4. BD Horizon™ Fixable Viability Stain 510 se puede utilizar en ensayos de tinción intracelular que requieren fijación con formaldehído y permeabilización con metanol y detergentes como los utilizados para la tinción BD Phosflow™ (p. ej., n.º de cat. 558050, BD Phosflow™ Perm Buffer III), tinción intracelular de citocinas (p. ej., n.º de cat. 554714, BD Cytofix/Cytoperm™ Fixation/Permeablization Kit) o ​​tinción de factores de transcripción (p. ej., n.º de cat. 562574, BD Pharmingen™ Transcription Factor Buffer Set). 5. Las células apoptóticas pueden presentar una tinción variable. Recomendamos la cotinción con, por ejemplo, Anexina V APC (n.° de cat. 550475) si se desea realizar un análisis más detallado de las células apoptóticas.
Avisos del producto: Dado que las aplicaciones varían, cada investigador debe titular el reactivo para obtener resultados óptimos. Consulte los protocolos técnicos en www.bdbiosciences.com/us/s/resources. Para obtener información sobre los espectros de fluorocromos y la configuración adecuada del instrumento, consulte nuestra página web sobre citometría de flujo multicolor en www.bdbiosciences.com/colors.