BD, 564903, BD Pharmingen™ DRAQ5™

Aplicación: Bioimagen, inmunofluorescencia, tinción intracelular (citometría de flujo) (probado durante el desarrollo)
Concentración: 5 mM
ID de registro: AB_2869620
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: Conservar sin diluir a 4 °C y protegido de la luz. No congelar.
Procedimientos de ensayo recomendados: Procedimientos de ensayo recomendados Tinción de células vivas para análisis de contenido de ADN por citometría de flujo 1. Obtenga una suspensión de células individuales. 2. Resuspenda las células a 0,5 x 10^6 células/ml o menos en medio completo u otro tampón sin azida que contenga 20 μM de DRAQ5™. 3. Incube a 37 °C durante 5-15 minutos. a. La densidad celular óptima, la concentración de DRAQ5™ y el tiempo de tinción para el análisis de contenido de ADN pueden variar según el tipo de célula. Las condiciones del ensayo deben optimizarse en los primeros experimentos para obtener mejores resultados. 4. Sedimente las células por centrifugación y aspire el medio u otro tampón sin azida que contenga DRAQ5™. 5. Resuspenda las células en tampón de tinción BD Pharmingen™ (FBS) (n.º de cat. 554656) o PBS 1× y proceda inmediatamente al análisis por citometría de flujo. Las células también pueden analizarse sin lavar, pero esto puede reducir la resolución del histograma de contenido de ADN. Tinción de células fijadas para el análisis del contenido de ADN mediante citometría de flujo: 1. Obtenga una suspensión de células individuales. 2. Trate las células en hielo durante 30 minutos con etanol helado al 70-80 %. a. La fijación con etanol suele proporcionar los histogramas más resueltos. Sin embargo, este reactivo también se ha utilizado con éxito para el análisis del contenido de ADN con el protocolo Transcription Factor Buffer Set (n.º de cat. 562574) o BD Cytofix™ Fixation Buffer (n.º de cat. 554655) y BD Phosflow™ Perm III (n.º de cat. 558050). 3. Lave las células una vez con BD Pharmingen™ Stain Buffer (FBS). 4. Diluya la solución DRAQ5™ a 20 μM en solución salina tamponada con fosfato de Dulbecco (DPBS) 1× u otro tampón sin azida inmediatamente antes de usar. 5. Teñir las células durante 5-15 minutos a una densidad celular de 0,5 x 10^6 células/mL o menos. No es necesario lavar más antes del análisis. a. La densidad celular y la concentración óptimas de DRAQ5™ para el análisis del contenido de ADN pueden variar según el tipo celular. Las condiciones del ensayo deben optimizarse en los primeros experimentos para obtener los mejores resultados. 6. Proceder al análisis por citometría de flujo. Tinción inmunofluorescente de células vivas para visualización nuclear 1. Diluya la solución DRAQ5™ a 5-20 μM en medio completo u otro tampón sin azida inmediatamente antes de usar. 2. Añada la solución DRAQ5™ a las muestras e incube a 37 °C durante 5-30 minutos. El tiempo de tinción requerido depende del tipo celular. 3. Retire la solución DRAQ5™ de las células al final del período de incubación y agregue BD Pharmingen™ Stain Buffer (FBS) (Cat. No. 554656) o 1× DPBS. Las células también pueden analizarse sin lavar, pero esto puede aumentar el fondo del colorante no unido. 4. Proceda a la obtención de imágenes. Recomendamos usar un filtro de 715LP o de longitud de onda más larga, aunque el colorante se detecta bien en los filtros que se usan típicamente para detectar Alexa Fluor® 647 (p. ej., 660/20 o 692/40 nm). Tenga en cuenta que el colorante unido al dsADN fluorescerá brillantemente en el núcleo y el colorante no unido puede fluorescer tenuemente en el citoplasma, lo que permite la segmentación de los compartimentos citoplasmático y nuclear. Tinción inmunofluorescente de células fijadas para visualización nuclear 1. Fije y permeabilice las células como se desee. 2. Diluya la solución DRAQ5™ a 5-20 μM en DPBS 1× u otro tampón sin azida inmediatamente antes de usar. 3. Añada la solución DRAQ5™ a cada pocillo al menos 5 minutos antes del análisis. 4. Proceda a la obtención de imágenes. Recomendamos usar un filtro de 715 LP o de mayor longitud de onda, aunque el colorante se detecta bien en los filtros que se suelen usar para detectar Alexa Fluor® 647 (p. ej., 660/20 o 692/40 nm). Tenga en cuenta que el colorante unido al dsADN presenta una fluorescencia intensa en el núcleo, mientras que el colorante no unido puede presentar una fluorescencia tenue en el citoplasma, lo que permite la segmentación de los compartimentos citoplasmático y nuclear. Nota: Este reactivo ha sido desarrollado y certificado para la aplicación de bioimagen. Sin embargo, no se realiza una prueba de bioimagen rutinaria en todos los lotes. Advertencia: DRAQ5™ contiene < 1% 1,5-BIS{[2-(DIMETILAMINO)ETIL]AMINO}-4,8-DIHIDROXIANTRACENO-9,10-DIONA Indicaciones de peligro Provoca irritación cutánea. Provoca irritación ocular grave. Puede provocar irritación respiratoria. Consejos de precaución Llevar guantes/ropa/protección ocular/protección facial. Lavarse bien después de manipular. EN CASO DE CONTACTO CON LOS OJOS: Aclarar cuidadosamente con agua durante varios minutos. Quitar las lentes de contacto, si lleva y resulta fácil. Seguir aclarando. Si persiste la irritación ocular: Consultar a un médico. Quitarse la ropa contaminada y lavarla antes de volver a usarla. Llamar a un CENTRO DE TOXICOLOGÍA o a un médico si se encuentra mal. Si se produce irritación cutánea: Consultar a un médico. EN CASO DE CONTACTO CON LA PIEL: Lavar con abundante agua Evitar respirar el polvo/el humo/el gas/la niebla/los vapores/el aerosol. Utilizar únicamente en exteriores o en un área bien ventilada. EN CASO DE INHALACIÓN: Transportar a la persona al aire libre y mantenerla en una posición que le facilite la respiración. Almacenar en un lugar bien ventilado. Mantener el recipiente bien cerrado. Guardar bajo llave. Eliminar el contenido/el recipiente en una planta de tratamiento y eliminación adecuada, de acuerdo con las leyes y normativas aplicables y las características del producto en el momento de la eliminación.
Avisos del producto: DRAQ5™ es una marca registrada de BioStatus Ltd. FlowJo es una marca registrada de Tree Star Inc. Alexa Fluor® es una marca registrada de Molecular Probes, Inc., Eugene, OR. Este anticuerpo ha sido desarrollado y certificado para aplicaciones de bioimagen. Sin embargo, no se realiza una prueba de bioimagen de rutina en todos los lotes. Se recomienda a los investigadores titular el reactivo para un rendimiento óptimo. Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para consultar los protocolos técnicos.