BD, 564904, BD Pharmingen™ DRAQ7™

Preparación y almacenamiento: Conservar sin diluir a 4 °C y protegido de la luz. No congelar.
Procedimientos de ensayo recomendados: Procedimientos de ensayo recomendados Tinción de células vivas para análisis de viabilidad por citometría de flujo 1. Obtenga una suspensión de células individuales. 2. Resuspenda las células en solución salina tamponada con fosfato de Dulbecco (DPBS) 1× u otro tampón sin azida que contenga 1-3 μM de DRAQ7™. a. La concentración óptima de DRAQ7™ para el análisis de viabilidad puede variar según el tipo de célula. Recomendamos titular el reactivo para el tipo de célula de interés en los primeros experimentos. b. Además, las células apoptóticas pueden teñirse con cantidades variables de DRAQ7™. Recomendamos la tinción conjunta con, por ejemplo, BD Pharmingen™ FITC Annexin V (n.º de cat. 556419) si se desea un análisis más detallado de las células apoptóticas. 3. Incube 5 minutos a temperatura ambiente. No es necesario lavar antes del análisis. 4. Proceda al análisis por citometría de flujo. Tinción de células fijadas para el análisis del contenido de ADN mediante citometría de flujo. 1. Obtenga una suspensión celular. 2. Trate las células en hielo durante 30 minutos con etanol helado al 70-80 %. a. La fijación con etanol suele proporcionar los histogramas con mayor resolución. Sin embargo, este reactivo también se ha utilizado con éxito para el análisis del contenido de ADN con el protocolo BD Pharmingen™ Transcription Factor Buffer Set (n.º de cat. 562574/562725) o BD Cytofix™ Fixation Buffer (n.º de cat. 554655) y BD Phosflow™ Perm III (n.º de cat. 558050). 3. Lave las células una vez con BD Pharmingen™ Stain Buffer (FBS) (n.º de cat. 554656). 4. Diluya DRAQ7™ a 20 μM en DPBS 1× u otro tampón sin azida inmediatamente antes de usar. 5. Teñir las células durante 5-15 minutos a una densidad celular de 0,5E6 células/ml o menos. No es necesario lavar más antes del análisis. a. La densidad celular óptima y la concentración de DRAQ7™ para el análisis del contenido de ADN pueden variar según el tipo de célula. Las condiciones del ensayo deben optimizarse en los primeros experimentos para obtener los mejores resultados. 6. Proceda al análisis por citometría de flujo. Tinción inmunofluorescente de células fijadas para visualización nuclear 1. Fije y permeabilice las células como desee. 2. Diluya la solución DRAQ7™ a 5-20 μM en DPBS 1× u otro tampón sin azida inmediatamente antes de usar. 3. Añada la solución DRAQ7™ a cada muestra al menos 5 minutos antes del análisis. 4. Proceda a la obtención de imágenes. Recomendamos usar un filtro de longitud de onda de 715LP o mayor, aunque el colorante se detecta bien en los filtros que se usan típicamente para detectar Alexa Fluor® 647 (p. ej., 660/20 o 692/40). Tenga en cuenta que el colorante unido a dsADN fluorescerá brillantemente en el núcleo y el colorante no unido puede fluorescer tenuemente en el citoplasma, lo que permite la segmentación de los compartimentos citoplasmático y nuclear. Nota: Este reactivo ha sido desarrollado y certificado para la aplicación de bioimágenes. Sin embargo, no se realiza una prueba de bioimágenes de rutina en cada lote. Advertencia: DRAQ7™ contiene < 1% de 1,5-BIS{[2-(DIMETILAMINO)ETIL]AMINO}-4,8-DIHIDROXIANTRACENO-9,10-DIONA Indicaciones de peligro Provoca irritación cutánea. Provoca irritación ocular grave. Puede causar irritación respiratoria. Declaraciones de precaución Use guantes/ropa/protección ocular/protección facial de protección. Lávese bien después de manipularlo. EN CASO DE CONTACTO CON LOS OJOS: Enjuagar cuidadosamente con agua durante varios minutos. Quitar las lentes de contacto, si lleva y resulta fácil. Seguir enjuagando. Si persiste la irritación ocular: Consultar a un médico. Quitar la ropa contaminada y lavarla antes de volver a usarla. Llamar a un CENTRO DE TOXICOLOGÍA o a un médico si se encuentra mal. Si se produce irritación cutánea: Consultar a un médico. EN CASO DE CONTACTO CON LA PIEL: Lavar con abundante agua. Evitar respirar el polvo/el humo/el gas/la niebla/los vapores/el aerosol. Utilizar únicamente en exteriores o en un área bien ventilada. EN CASO DE INHALACIÓN: Transportar a la persona al exterior y mantenerla en una posición que le facilite la respiración. Almacenar en un lugar bien ventilado. Mantener el recipiente herméticamente cerrado. Guardar bajo llave. Eliminar el contenido/el recipiente en una instalación de tratamiento y eliminación adecuada de acuerdo con las leyes y normativas aplicables, y las características del producto en el momento de la eliminación.
Avisos del producto: DRAQ7™ es una marca registrada de BioStatus Ltd. FlowJo es una marca registrada de Tree Star Inc. Alexa Fluor® es una marca registrada de Molecular Probes, Inc., Eugene, OR. mTESR™1 es una marca registrada de StemCell Technologies. Este anticuerpo ha sido desarrollado y certificado para su aplicación en bioimagen. Sin embargo, no se realiza una prueba de bioimagen de rutina en todos los lotes. Se recomienda a los investigadores titular el reactivo para un rendimiento óptimo. Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para consultar los protocolos técnicos.