BD, 564907, Solución DAPI BD Pharmingen™

Aplicación: Bioimagen, citometría de flujo, inmunofluorescencia (probada durante el desarrollo)
Concentración: 1,0 mg/ml
ID de registro: AB_2869624
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: Evite congelar y descongelar repetidamente el producto. El producto debe conservarse sin diluir a -20 °C para almacenamiento prolongado y puede conservarse sin diluir a 4 °C para almacenamiento breve.
Procedimientos de ensayo recomendados: Procedimientos de ensayo recomendados Tinción de células vivas para análisis de viabilidad por citometría de flujo 1. Obtenga una suspensión de células individuales. 2. Resuspenda las células en tampón de tinción BD Pharmingen™ (FBS) (n.º de cat. 554656) o solución salina tamponada con fosfato de Dulbecco (DPBS) 1× que contenga 0,05-0,2 μg/ml de DAPI. a. La concentración óptima de DAPI para el análisis de viabilidad puede variar según el tipo de célula. Recomendamos titular el reactivo para el tipo de célula de interés en los primeros experimentos. b. Además, las células apoptóticas pueden teñirse con cantidades variables de DAPI. Recomendamos la tinción conjunta con BD Pharmingen™ FITC Annexin V (n.º de cat. 556419) si se desea un análisis más detallado de las células apoptóticas. 3. Incube 5 minutos a temperatura ambiente. No es necesario lavar antes del análisis. 4. Proceder al análisis por citometría de flujo. Tinción de células fijadas para el análisis del contenido de ADN por citometría de flujo: 1. Obtener una suspensión celular. 2. Tratar las células en hielo durante 30 minutos con etanol helado al 70-80 %. a. La fijación con etanol suele proporcionar los histogramas más resueltos. Sin embargo, este reactivo también se ha utilizado con éxito para el análisis del contenido de ADN con el protocolo Transcription Factor Buffer Set (n.º de cat. 562574/562725) o BD Cytofix™ Fixation Buffer (n.º de cat. 554655) y BD Phosflow™ Perm Buffer III (n.º de cat. 558050). 3. Lavar las células una vez con BD Pharmingen™ Stain Buffer (FBS). 4. Diluya la solución de DAPI a 0,5-1 μg/ml en tampón de tinción (FBS) o 1× DPBS inmediatamente antes de usar. 5. Tiña las células durante 5-15 minutos a una densidad celular de 1 - 2 x 10^6 células/ml. No es necesario lavar más antes del análisis. a. La densidad celular óptima y la concentración de DAPI para el análisis del contenido de ADN pueden variar según el tipo de célula. Las condiciones del ensayo deben optimizarse en los primeros experimentos para obtener los mejores resultados. 6. Proceda al análisis por citometría de flujo. Tinción inmunofluorescente de células fijadas para visualización nuclear 1. Fije y permeabilice las células como desee. 2. Diluya la solución de DAPI a 1 µg/ml en 1× DPBS inmediatamente antes de usar. 3. Añada la solución de DAPI a cada muestra al menos 15 minutos antes del análisis. 4. Proceda a la obtención de imágenes. Nota: Este reactivo ha sido desarrollado y certificado para la aplicación de bioimágenes. Sin embargo, no se realizan pruebas de bioimagen de rutina en todos los lotes.
Avisos del producto: FlowJo es una marca registrada de Tree Star Inc. Alexa Fluor® es una marca registrada de Molecular Probes, Inc., Eugene, OR. Para obtener información sobre espectros de fluorocromos y la configuración adecuada del instrumento, consulte nuestra página web de citometría de flujo multicolor en www.bdbiosciences.com/colors. Para consultar los protocolos técnicos, visite www.bdbiosciences.com/us/s/resources.