BD, 565231, BD Pharmingen™ Alexa Fluor® 647 Antitransferasa terminal humana (TdT) de ratón

Nombre alternativo: TdT; DNTT; Transferasa terminal; Enzima de adición terminal
Reactividad: Humana (Pruebas de control de calidad)
Isotipo: Ratón BALB/c IgG1, κ
Inmunógeno: TdT humana purificada
Aplicación: Tinción intracelular (citometría de flujo) (Probado rutinariamente)
Vol. por prueba: 5 µl
ID de registro: AB_2739125
Tampón de almacenamiento: Solución tamponada acuosa que contiene BSA y ≤0,09 % de azida sódica.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: Conservar sin diluir a 4 °C y protegido de la luz. No congelar. El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad. El anticuerpo se conjugó con Alexa Fluor® 647 en condiciones óptimas y se eliminó el Alexa Fluor® 647 que no reaccionó.
Procedimientos de ensayo recomendados: Procedimientos de ensayo recomendados 1. Coseche las células diana cultivadas en un tubo de centrífuga cónico de 50 ml. Centrifugue a 1000 rpm durante 10 minutos, aspire y deseche el sobrenadante. 2. Lave el pellet celular una vez con PBS y mezcle suavemente. Centrifugue a 1000 rpm durante 10 minutos, aspire y deseche el sobrenadante. 3. Fije las células añadiendo 15-20 ml de formaldehído al 1% mientras agita el pellet en un vórtex e incube durante 20 minutos a temperatura ambiente. Centrifugue a 1000 rpm durante 10 minutos, aspire y deseche el sobrenadante. 4. Añada 15-20 ml de Triton™ X-100 al 0,1% en PBS e incube durante 5-10 minutos. Centrifugue a 1000 rpm durante 10 minutos, aspire y deseche el sobrenadante. 5. Resuspenda las células en PBS + 1% FBS (tampón de lavado) hasta una concentración final de aproximadamente 1 x 10^6 células por 50 µl. 6. Prepare un tubo con 50 µl de suspensión celular y añada 20 µl de anticuerpo fluorescente anti-TdT humana. Prepare otro tubo con 50 µl de suspensión celular y añada 20 µl de un control de isotipo de Ig fluorescente compatible. Mezcle suavemente el contenido del tubo e incube en oscuridad a temperatura ambiente durante 20-30 minutos. 7. Lave las células con 2 ml de tampón de lavado por tubo. Centrifugue durante 5 minutos a 1000 rpm, aspire y deseche el sobrenadante. 8. Resuspenda las células en 500 µl de tampón de lavado y analice mediante citometría de flujo.
Avisos del producto: Avisos del producto Este reactivo ha sido prediluido para su uso al volumen recomendado por prueba. Normalmente usamos 1 × 10^6 células en una muestra experimental de 100 µl (una prueba). Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para conocer los protocolos técnicos. La emisión del fluorocromo Alexa Fluor® 647 se recoge con la misma configuración del instrumento que para la aloficocianina (APC). Los conjugados de anticuerpos de los colorantes Alexa Fluor®, Pacific Blue™ y Cascade Blue® de este producto se venden bajo licencia de Molecular Probes, Inc. solo para uso en investigación, excluyendo el uso en combinación con microarrays o como reactivos específicos de analitos. Los colorantes Alexa Fluor® (excepto Alexa Fluor® 430), el colorante Pacific Blue™ y el colorante Cascade Blue® están cubiertos por patentes pendientes y emitidas. Alexa Fluor® es una marca registrada de Molecular Probes, Inc., Eugene, OR. Triton es una marca registrada de Dow Chemical Company. Todas las proteínas séricas provienen de mataderos inspeccionados por el USDA ubicados en Estados Unidos. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico, altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Para obtener información sobre los espectros de fluorocromo y la configuración adecuada del instrumento, consulte nuestra página web sobre citometría de flujo multicolor en www.bdbiosciences.com/colors. Se debe utilizar un control de isotipo a la misma concentración que el anticuerpo de interés.