BD, 565388, Tinción de viabilidad reparable BD Horizon™ 780

Aplicación: Citometría de flujo, tinción intracelular (citometría de flujo) (probado durante el desarrollo)
ID de registro: AB_2869673
Estado regulatorio: RUO
Procedimientos de ensayo recomendados: Procedimientos de ensayo recomendados Preparación Lleve el polvo de colorante FVS780 y 180 μl de dimetilsulfóxido (DMSO; p. ej., Sigma D2650) fresco de grado de cultivo celular a temperatura ambiente. Agregue 180 μl de DMSO y agite bien la solución. Inspeccione la solución y repita el agitado hasta que el colorante madre se haya disuelto completamente. Esta es la solución madre. Almacenamiento Al recibirlo, almacene el colorante seco desecado y protegido de la luz a -80 °C hasta su uso. Después de la reconstitución con DMSO, almacene la solución madre a -20 °C en pequeñas alícuotas. No use el colorante reconstituido después de 90 días de almacenamiento. Deseche la solución de colorante después de 90 días de la reconstitución con DMSO. Requisitos de citometría Se pueden utilizar citómetros de flujo equipados con láser rojo (p. ej., BD FACSCanto™ II, BD™ LSR II, BD LSRFortessa™ o BD Accuri™ C6). Este colorante se puede leer en filtros comúnmente utilizados para APC-Cy™7 (p. ej., 780/60). La compensación de fluorescencia se logra mejor utilizando muestras celulares de interés. Al diseñar paneles de tinción multicolor, tenga en cuenta el derrame de fluorescencia en los canales BD Horizon™ BUV737, BD Horizon™ BV786 y PE-Cy™7 (cuando se lee en el láser amarillo-verde). Los paneles se deben optimizar para tener en cuenta este derrame. Para reducir el derrame de fluorescencia, recomendamos titular FVS780 y utilizar la concentración de colorante más baja posible que proporcione una resolución adecuada de las poblaciones de células vivas y muertas de interés. Procedimiento Marcaje de células con Fixable Viability Stain 780 1. Prepare las células para la tinción de citometría de flujo utilizando tampones sin azida sódica. 2. Lave las células una vez en solución salina tamponada con fosfato de Dulbecco (1X DPBS) sin azida sódica ni proteínas. 3. Resuspenda las células a 1-10x10^6 células/ml en 1X DPBS sin azida sódica ni proteínas. 4. Añada 1 μl de solución madre BD Horizon™ Fixable Viability Stain 780 por cada 1 ml de suspensión celular (1:1000) y agite inmediatamente con vórtex. a. Nota: Recomendamos titular el colorante para un rendimiento óptimo, ya que los diferentes tipos de células y las diferentes aplicaciones pueden dar lugar a un amplio grado de variabilidad en la tinción. 5. Incube la mezcla durante 10-15 minutos a temperatura ambiente protegida de la luz. a. Opcional: Como alternativa, incubar las mezclas a 37 °C durante 5-7 minutos o a 2-8 °C durante 30-60 minutos. 6. Lavar las células dos veces con 2 ml de tampón de tinción BD Pharmingen™ (FBS) (n.º de cat. 554656) o equivalente. 7. Decante el sobrenadante y mezcle suavemente para romper el sedimento celular. 8. Resuspender las células en tampón de tinción (FBS) o equivalente. 9. Teñir, fijar y permeabilizar las células según se desee para aplicaciones posteriores. Notas: 1. Cada usuario debe determinar las concentraciones óptimas de reactivos, células y condiciones para el ensayo de interés. Recomendamos titular el reactivo en los primeros experimentos para obtener resultados óptimos. 2. La reactividad del colorante libre se extingue lavando con tampón que contenga proteína (p. ej., FBS o BSA). 3. Las células se pueden teñir a granel antes de congelarlas o teñirlas con anticuerpos fluorescentes. 4. El tinte de viabilidad fijable BD Horizon™ 780 se puede utilizar en ensayos de tinción intracelular que requieren fijación con formaldehído y permeabilización con metanol y detergentes, como los utilizados para la tinción con BD Phosflow™ (p. ej., n.º de cat. 558050, tampón de permeación BD Phosflow™ III), tinción de citocinas intracelulares (p. ej., n.º de cat. 554714, kit de fijación/permeabilización BD Cytofix/Cytoperm™) o tinción de factores de transcripción (p. ej., n.º de cat. 562574/562725, juego de tampones de factores de transcripción BD Pharmingen™). 5. Las células apoptóticas pueden mostrar una tinción variable. Recomendamos la tinción conjunta con, p. ej., anexina V FITC (n.º de cat. 556419) si se desea realizar un análisis más detallado de las células apoptóticas. Peligro: Provoca lesiones oculares graves. Precauciones: Usar guantes/ropa/protección ocular/protección facial. EN CASO DE CONTACTO CON LOS OJOS: Enjuagar con abundante agua durante varios minutos. Quitar las lentes de contacto, si lleva y resulta fácil. Seguir enjuagando. Llamar inmediatamente a un centro de toxicología o a un médico. Eliminar el contenido/recipientes en una instalación de tratamiento y eliminación adecuada, de acuerdo con la legislación y normativas aplicables y las características del producto en el momento de la eliminación.
Avisos del producto: Dado que las aplicaciones varían, cada investigador debe titular el reactivo para obtener resultados óptimos. Para conocer los espectros de fluorocromos y la configuración adecuada del instrumento, consulte nuestra página web de citometría de flujo multicolor en www.bdbiosciences.com/colors. Cy es una marca registrada de GE Healthcare. Antes de teñir con este reactivo, confirme que su citómetro de flujo sea capaz de excitar el fluorocromo y discriminar la fluorescencia resultante. Consulte http://regdocs.bd.com para acceder a las fichas de datos de seguridad (FDS). Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para consultar los protocolos técnicos.