BD, 566644, Kit de evaluación de fluorocromo CD4 para ratón BD Horizon™

Concentración: 0,2 mg/ml
Aplicación: Citometría de flujo (probada rutinariamente)
Estado regulatorio: RUO
ID de registro: AB_2869803
Descripción: Descripción El kit de evaluación de fluorocromo CD4 de ratón incluye una muestra de evaluación de 10 µg de los siguientes componentes: • Antirratón CD4 RM4-5 de rata Alexa Fluor® 488 • Antirratón CD4 RM4-5 de rata BV480 • Antirratón CD4 RM4-5 de rata Alexa Fluor® 647 • Antirratón CD4 RM4-5 de rata BV510 • Antirratón CD4 RM4-5 de rata Alexa Fluor® 700 • Antirratón CD4 RM4-5 de rata BV605 • Antirratón CD4 RM4-5 de rata APC • Antirratón CD4 RM4-5 de rata BUV615 • Antirratón CD4 GK1.5 de rata APC-Cy™7 • Antirratón CD4 RM4-5 de rata BV650 • Antirratón CD4 RM4-5 de rata APC-H7 • Antirratón CD4 GK1.5 de rata BV711 RM4-5 • APC-R700 Anti-Ratón CD4 Rata RM4-5* • BV786 Rata Anti-Ratón CD4 RM4-5 • BB515 Rata Anti-Ratón CD4 GK1.5 * • FITC Rata Anti-Ratón CD4 RM4-5 • BB700 Rata Anti-Ratón CD4 RM4-5 • PE Rata Anti-Ratón CD4 RM4-5 • BUV395 Rata Anti-Ratón CD4 GK1.5 • PE-CF594 Rata Anti-Ratón CD4 RM4-5 • BUV496 Rata Anti-Ratón CD4 GK1.5 • PE-Cy™5 Rata Anti-Ratón CD4 RM4-5 • BUV563 Rata Anti-Ratón CD4 GK1.5 • PE-Cy™7 Rata Anti-Ratón CD4 RM4-5 • BUV661 Rata Anti-Ratón CD4 RM4-5 * • PerCP-Cy™5.5 Rata Anti-Ratón CD4 RM4-5 • BUV737 Rata Anti-Ratón CD4 RM4-5 • V450 Rata Anti-Ratón CD4 RM4-5 • BUV805 Rata Anti-Ratón CD4 GK1.5 • V500 Rata Anti-Ratón CD4 RM4-5 • BV421 Rata Anti-Ratón CD4 GK1.5 • R718 Rata Anti-Ratón CD4 RM4-5 • RY586 Rata Anti-Ratón CD4 GK1.5 • RB780 Rata Anti-Ratón CD4 GK1.5 • RB705 Rata Anti-Ratón CD4 GK1.5 • RB545 Rata Anti-Ratón CD4 GK1.5 • RB744 Rata Anti-Ratón CD4 GK1.5 • RB613 Rata Anti-Ratón CD4 GK1.5 • RY610 Rata Anti-Ratón CD4 GK1.5 • RY703 Rata Anti-Ratón CD4 GK1.5 • RY775 Rata Anti-Ratón CD4 GK1.5 Para acceder a la Hoja de Datos Técnicos (TDS) de conjugados individuales, busque el nombre del clon y/o la especificidad en el sitio web: http://www.bdbiosciences.com . El brillo del fluorocromo es representativo del clon específico Anti-Ratón CD4, otros clones pueden diferir. Como para todos los reactivos en tándem, no se debe asumir que los valores de derrame sean idénticos para otros clones . Los reactivos en este kit se deben usar para la configuración del instrumento y no para inmunofenotipado, por lo tanto, los reactivos marcados con un asterisco no están disponibles como productos de catálogo de viales individuales, pero pueden estar disponibles como un producto personalizado . Tenga en cuenta que los siguientes colorantes se detectan en el mismo canal. Para acceder a los espectros de absorción y emisión de cada fluorocromo individual, vaya a: https://www.bdbiosciences.com/en-us/resources/bd-spectrum-viewer • FITC, BB515 y RB545 • V450 y BV421 • V500, BV510, BV480 • BB700 y PerCP-Cy5.5 • APC-Cy7 y APC-H7 • APC-R700, Alexa Fluor 700 y R718 • PE y RY586 • PE-Cy7 y RB780 (cuando se utiliza láser azul)
Preparación y almacenamiento: El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad. El anticuerpo se conjugó en condiciones óptimas que minimizan la presencia de colorante y anticuerpo no conjugados. Conservar sin diluir a 4 °C y protegido de la exposición prolongada a la luz. No congelar.
Procedimientos de ensayo recomendados: Procedimientos de ensayo recomendados Las BD® CompBeads se pueden utilizar como sustitutos para evaluar el derrame de fluorescencia (compensación). Cuando los anticuerpos conjugados con fluorocromos se unen a las BD® CompBeads, tienen propiedades espectrales muy similares a las de las células. Sin embargo, para algunos fluorocromos puede haber pequeñas diferencias en las emisiones espectrales en comparación con las células, lo que resulta en valores de derrame que difieren cuando se comparan con los controles biológicos. Se recomienda encarecidamente que, al utilizar un reactivo por primera vez, los usuarios comparen el derrame en las células y las BD® CompBeads para asegurarse de que las BD® CompBeads sean apropiadas para su aplicación celular específica. Para obtener resultados óptimos y reproducibles, se debe utilizar el tampón de tinción BD Horizon Brilliant™ siempre que se utilicen colorantes BD Horizon Brilliant en un panel de citometría de flujo multicolor. Las interacciones de los colorantes fluorescentes pueden causar artefactos de tinción que pueden afectar la interpretación de los datos. El tampón de tinción BD Horizon Brilliant fue diseñado para minimizar estas interacciones. Cuando se utiliza el tampón de tinción BD Horizon Brilliant en el panel multicolor, también debe utilizarse en los controles de compensación correspondientes para todos los colorantes a fin de lograr la compensación más precisa. Para una compensación más precisa, los controles de compensación creados con células o microesferas deben exponerse al tampón de tinción BD Horizon Brilliant durante el mismo tiempo que el panel multicolor correspondiente. Puede encontrar más información en la hoja de datos técnicos del tampón de tinción BD Horizon Brilliant (n.º de cat. 563794/566349) o del tampón de tinción BD Horizon Brilliant Plus (n.º de cat. 566385). Para obtener resultados óptimos, se recomienda realizar dos lavados después de la tinción con anticuerpos. Las células pueden prepararse, teñirse con anticuerpos y lavarse dos veces con tampón de lavado según los protocolos establecidos para la tinción de inmunofluorescencia, antes de la adquisición en un citómetro de flujo. Realizar menos pasos de lavado de los recomendados puede provocar una mayor dispersión de la población negativa. La concentración recomendada de reactivo para estudios de índice de tinción es de 0,1 µg/prueba.
Avisos del producto: Avisos del producto Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para conocer los protocolos técnicos. Cuando se utilizan altas concentraciones de anticuerpo, se ha observado una unión de fondo de este colorante a fragmentos eritroides producidos por lisis basada en cloruro de amonio, como con BD Pharm Lyse™ Lysing Buffer (n.º de cat. 555899), cuando el conjugado de anticuerpo estaba presente durante el procedimiento de lisis. Esto puede causar una tinción inespecífica de las células diana, como los leucocitos, que se han unido a los fragmentos eritroides resultantes. Este fondo se puede mitigar mediante cualquiera de los siguientes: titular el conjugado de anticuerpo a una concentración más baja, fijar las muestras con formaldehído o eliminar los eritrocitos antes de la tinción (p. ej., centrifugación en gradiente o prelisis con lavado). Este fondo no se ha observado cuando las células se lisaron con BD FACS™ Lysing Solution (n.º de cat. 349202) después de la tinción. Dado que las aplicaciones varían, cada investigador debe titular el reactivo para obtener resultados óptimos. Se debe utilizar un control de isotipo a la misma concentración que el anticuerpo de interés. Todas las proteínas séricas provienen de mataderos inspeccionados por el USDA ubicados en Estados Unidos. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico, altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Para obtener información sobre los espectros de fluorocromos y la configuración adecuada del instrumento, consulte nuestra página web sobre citometría de flujo multicolor en www.bdbiosciences.com/colors. CF™ es una marca comercial de Biotium, Inc. Cy es una marca comercial de GE Healthcare. Pacific Blue™ es una marca comercial de Molecular Probes, Inc., Eugene, OR. Este producto se proporciona en virtud de un acuerdo entre BIOTIUM y BD Biosciences. La fabricación, el uso, la venta, la oferta de venta o la importación de este producto están sujetos a una o más patentes o solicitudes pendientes de propiedad o licencia de Biotium, Inc. Este producto, y solo en la cantidad adquirida por el comprador, puede usarse exclusivamente para su propia investigación interna, de acuerdo con la documentación adjunta del producto. No se otorga por la presente ningún otro derecho de uso, venta o transferencia de (a) este producto o (b) sus componentes de forma expresa, implícita o por impedimento legal. Este producto es solo para uso en investigación. Los usos diagnósticos requieren una licencia independiente de Biotium, Inc. Para obtener información sobre la compra de una licencia para este producto, incluso para fines distintos a la investigación, comuníquese con Biotium, Inc., 3159 Corporate Place, Hayward, CA 94545, Tel.: (510) 265-1027. Fax: (510) 265-1352. Correo electrónico: btinfo@biotium.com. La fabricación, el uso, la venta, la oferta de venta o la importación de este producto están sujetos a una o más patentes o solicitudes pendientes. Este producto, y solo en la cantidad adquirida por el comprador, puede usarse exclusivamente para la investigación interna del comprador, de manera consistente con la literatura del producto que lo acompaña. Ningún otro derecho para usar, vender o transferir (a) este producto, o (b) sus componentes se otorga por la presente de manera expresa, implícita o por impedimento legal. Los usos de diagnóstico requieren una licencia por separado. Tenga en cuenta las siguientes precauciones: La absorción de luz visible puede alterar significativamente la transferencia de energía que ocurre en cualquier conjugado de fluorocromo en tándem; por lo tanto, recomendamos que se tomen precauciones especiales (como envolver viales, tubos o gradillas en papel de aluminio) para evitar la exposición de los reactivos conjugados, incluidas las células teñidas con esos reactivos, a la iluminación ambiental. Advertencia: Algunos conjugados APC-Cy7 y PE-Cy7 muestran cambios en su espectro de emisión con la exposición prolongada al formaldehído. Si no puede analizar las muestras fijadas en un plazo de cuatro horas, le recomendamos utilizar el fijador estabilizador BD™ (n.º de cat. 338036). El PE-Cy7 es un fluorocromo en tándem compuesto por R-ficoeritrina (PE), que se excita con luz de 488 nm y actúa como donante de energía, acoplado al colorante de cianina Cy7, que actúa como aceptor de energía y presenta una fluorescencia máxima de 780 nm. La emisión del fluorocromo en tándem PE-Cy7 se recoge en un detector para longitudes de onda de fluorescencia de 750 nm y superiores. Si bien se hace todo lo posible para minimizar la variación entre lotes en la eficiencia de la transferencia de energía del fluorocromo, pueden observarse diferencias en la emisión residual del PE. Por lo tanto, recomendamos realizar controles de compensación individuales para cada conjugado PE-Cy7. El PE-Cy7 está optimizado para su uso con un único láser de iones de argón que emite luz de 488 nm, y no existe una superposición significativa entre los espectros de emisión de PE-Cy7 y FITC. Al utilizar citómetros de doble láser, que pueden excitar directamente tanto el PE como el Cy7, recomendamos utilizar la compensación de haz cruzado durante la adquisición de datos o la compensación por software durante el análisis de datos. BD Horizon V450 tiene una absorción máxima de 406 nm y una emisión máxima de 450 nm. Antes de teñir con este reactivo, confirme que su citómetro de flujo sea capaz de excitar el fluorocromo y discriminar la fluorescencia resultante. BD Horizon V500 tiene una absorción máxima de 415 nm y una emisión máxima de 500 nm. Antes de teñir con este reactivo, confirme que su citómetro de flujo sea capaz de excitar el fluorocromo y discriminar la fluorescencia resultante. Consulte http://regdocs.bd.com para acceder a las fichas de datos de seguridad (FDS). Los conjugados de anticuerpos de los colorantes Alexa Fluor®, Pacific Blue™ y Cascade Blue® presentes en este producto se venden bajo licencia de Molecular Probes, Inc. únicamente para uso en investigación, excluyendo su uso en combinación con microarrays o como reactivos específicos para analitos. Los colorantes Alexa Fluor® (excepto Alexa Fluor® 430), Pacific Blue™ y Cascade Blue® están protegidos por patentes en trámite y emitidas. La emisión del fluorocromo Alexa Fluor® 488 se obtiene con la misma configuración del instrumento que para el isotiocianato de fluoresceína (FITC). Alexa Fluor® es una marca registrada de Molecular Probes, Inc., Eugene, OR. Este producto se proporciona bajo una licencia de propiedad intelectual entre Life Technologies Corporation y BD Businesses. La compra de este producto otorga al comprador el derecho intransferible de utilizar la cantidad adquirida del producto y sus componentes en la investigación que realice (ya sea una entidad académica o con fines de lucro). El comprador no puede vender ni transferir de otro modo (a) este producto (b) sus componentes ni (c) materiales fabricados con este producto o sus componentes a un tercero, ni utilizar de otro modo este producto, sus componentes ni los materiales fabricados con este producto o sus componentes para fines comerciales. Por fines comerciales se entiende cualquier actividad realizada por una parte a cambio de una contraprestación, que puede incluir, entre otras: (1) el uso del producto o sus componentes en la fabricación; (2) el uso del producto o sus componentes para proporcionar un servicio, información o datos; (3) el uso del producto o sus componentes con fines terapéuticos, diagnósticos o profilácticos; ni (4) la reventa del producto o sus componentes, independientemente de que dicho producto o sus componentes se revendan o no para su uso en investigación. Para obtener información sobre la compra de una licencia de este producto para cualquier otro uso, póngase en contacto con Life Technologies Corporation, Cell Analysis Business Unit Business Development, 29851 Willow Creek Road, Eugene, OR 97402, EE. UU., Tel.: (541) 465-8300. Fax: (541) 335-0504. La emisión del fluorocromo Alexa Fluor® 647 se obtiene con la misma configuración instrumental que para la aloficocianina (APC). El APC-Cy7 es un fluorocromo en tándem compuesto por aloficocianina (APC), excitado por líneas láser entre 595 y 647 nm, que actúa como donante de energía, acoplado al colorante de cianina Cy7™, que actúa como aceptor de energía y fluoresce a 780 nm. BD Biosciences Pharmingen ha maximizado la transferencia de energía del fluorocromo en el APC-Cy7, maximizando así la intensidad de su emisión de fluorescencia, minimizando la emisión residual del APC y la compensación electrónica requerida en sistemas de citometría de flujo multiláser-láser. Nota: Si bien se hace todo lo posible para minimizar la variación entre lotes en la emisión residual del APC, se recomienda encarecidamente analizar cada lote para detectar diferencias en la compensación requerida y realizar controles de compensación individuales para cada conjugado de APC-Cy7. La emisión del fluorocromo en tándem APC-Cy7 se recoge en un detector para longitudes de onda de fluorescencia de 750 nm y superiores. BD APC-H7 es un conjugado en tándem y un análogo de APC-Cy7 con las mismas propiedades espectrales. Presenta una intensidad reducida, pero está diseñado para una mayor estabilidad y un menor derrame en el canal APC, por lo que ofrece un mejor rendimiento que APC-Cy7. Presenta una absorción máxima de aproximadamente 650 nm. Al ser excitado por la luz de un láser rojo, el fluorocromo APC puede transferir energía al colorante de cianina, que emite a una longitud de onda mayor. La emisión máxima de fluorescencia resultante es de aproximadamente 767 nm. BD recomienda el uso de un filtro de paso largo de 750 nm junto con un detector sensible al rojo, como el Hamamatsu R3896 PMT. Al igual que con APC-Cy7, se requieren filtros especiales cuando se utiliza APC-H7 junto con APC. Nota: Si bien nuestros productos APC-H7 demuestran una mayor consistencia entre lotes que otros productos conjugados tándem APC, y se hace todo lo posible para minimizar la variación entre lotes en la emisión residual de APC, se recomienda encarecidamente analizar cada lote para detectar diferencias en la compensación requerida y realizar controles de compensación individuales para cada conjugado APC-H7. Si bien BD APC-H7 está diseñado para minimizar el derrame al canal APC y es más estable y menos afectado por la luz, la temperatura y los fijadores a base de formaldehído, en comparación con otros colorantes tándem APC-cianina, se recomienda minimizar al máximo la exposición a la luz, la temperatura y el fijador al trabajar con conjugados fluorescentes. El proceso de producción se sometió a rigurosas pruebas y validación para garantizar la generación de un conjugado de alta calidad con un rendimiento constante y una actividad de unión específica. Sin embargo, no se han realizado pruebas de verificación en todos los lotes de conjugado. Aunque se hace todo lo posible para minimizar la variación entre lotes en la eficiencia de la transferencia de energía del fluorocromo, pueden observarse diferencias en la emisión residual de BD Horizon™ BV421. Por lo tanto, recomendamos realizar controles de compensación individuales para cada conjugado BD Horizon™ BV605. Al ser excitado por el láser amarillo-verde (561 nm), la fluorescencia puede ser más brillante que al ser excitada por el láser azul (488 nm). Debido al amplio espectro de absorción del fluorocromo en tándem, se debe tener especial cuidado al utilizar citómetros multiláser, que pueden excitar directamente tanto PE como CF™594. PE-Cy5 está optimizado para su uso con un solo láser de iones de argón que emite luz de 488 nm. Debido al amplio espectro de absorción del fluorocromo en tándem PE-Cy5, se debe tener especial cuidado al utilizar citómetros de doble láser, que pueden excitar directamente tanto PE como Cy5™. PE-Cy5 es un fluorocromo en tándem compuesto por R-ficoeritrina (PE), que se excita con la luz de 488 nm de un láser de iones de argón y actúa como donante de energía, acoplado al colorante de cianina Cy5, que actúa como aceptor de energía y fluoresce a 670 nm. BD Biosciences Pharmingen ha maximizado la transferencia de energía del fluorocromo en PE-Cy5, maximizando así la intensidad de su emisión de fluorescencia, minimizando la emisión residual de PE y la variación entre lotes. Se ha descrito que los fluorocromos en tándem PE-Cy5 se unen a algunas clases de macrófagos y granulocitos humanos a través de receptores Fc, y que PE se une a linfocitos B de ratón a través de receptores Fc. La preincubación de leucocitos de ratón con el anticuerpo monoclonal anti-CD16/CD32 de ratón purificado Mouse BD Fc Block™ 2.4G2 puede reducir la unión inespecífica de los reactivos conjugados con PE-Cy5 a los linfocitos B de ratón. Sin embargo, no se deben utilizar reactivos conjugados con PE-Cy5 para teñir esplenocitos de ratones SJL, NOD y MRL, ya que se ha descrito que los linfocitos B y otros leucocitos presentan una tinción inespecífica independientemente del uso de Mouse BD Fc Block™ (el complejo CD72c se ha relacionado con la unión de PE-Cy5 en estas cepas). Los reactivos conjugados con los fluorocromos en tándem PE, PerCP, PerCP-Cy5.5, APC y APC-Cy7 pueden utilizarse en leucocitos de estas cepas de ratón. Los anticuerpos marcados con PerCP-Cy5.5 pueden utilizarse con reactivos marcados con FITC y R-PE en citómetros de flujo de láser único sin superposición espectral significativa de la fluorescencia de PerCP-Cy5.5, FITC y R-PE. Alexa Fluor® es una marca registrada de Life Technologies Corporation. Tenga en cuenta las siguientes precauciones: Recomendamos tomar precauciones especiales (como envolver los viales, tubos o gradillas en papel de aluminio) para proteger los reactivos conjugados, incluidas las células teñidas con dichos reactivos, de la exposición a la iluminación ambiental. La absorción de luz visible puede afectar significativamente los espectros de emisión y el rendimiento cuántico de los conjugados de fluorocromos en tándem. Los fluorocromos en tándem contienen un donante y un aceptor de energía. Si bien se hace todo lo posible para minimizar la variación entre lotes en la eficiencia de la transferencia de energía del fluorocromo, pueden observarse diferencias en la emisión residual del donante. Además, los citómetros multiláser pueden excitar directamente tanto el fluorocromo donante como el aceptor. Por lo tanto, recomendamos adquirir un control individual de tinción única para cada conjugado en tándem a fin de generar una matriz de compensación o de desmezcla espectral. Cy es una marca registrada de Global Life Sciences Solutions Germany GmbH o de una filial que opera bajo el nombre comercial de Cytiva. Para consultar las patentes estadounidenses aplicables, consulte bd.com/patents.
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