BD, 569991, Partículas de compensación y desmezcla BD™ SpectraComp™

Reactividad: Ratón, rata, hámster (probado en desarrollo)
Aplicación: Citometría de flujo (probada rutinariamente)
Vol. por prueba: 1 gota/prueba
Tampón de almacenamiento: Solución tamponada acuosa que contiene BSA y ≤0,09 % de azida sódica.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: Conservar sin diluir a 4 °C y protegido de la luz. No congelar.
Procedimientos de ensayo recomendados: Las partículas de compensación y desmezclado BD™ SpectraComp™ se han probado con anticuerpos Ig de ratón, rata y hámster conjugados con varios fluorocromos. Consulte las instrucciones específicas a continuación sobre el uso de las partículas de compensación y desmezclado BD™ SpectraComp™. 1. Agite bien las partículas de compensación y desmezclado BD™ SpectraComp™ antes de usar. 2. Añada 1 gota (aproximadamente 50 µl) de partículas de compensación y desmezclado BD™ SpectraComp™ al fondo de tubos de 12 × 75 mm o pocillos de placas de 96 pocillos por cada fluorocromo utilizado en el experimento. Se recomienda incluir un tubo para el control sin teñir. 3. Añada el reactivo de anticuerpo a la mezcla y agite en vórtex. Incubar a temperatura ambiente durante 15-30 minutos, protegido de la luz. Notas: • Se recomienda predeterminar la cantidad adecuada de reactivo de anticuerpo que mejor se adapte a la aplicación. • Tratar las partículas de desmezcla y compensación BD™ SpectraComp™ con el mismo protocolo utilizado para la muestra celular; por ejemplo, si el protocolo de prueba utiliza el tampón de tinción brillante BD Horizon™ o células permeabilizadas y fijadas, las partículas también deben tratarse con los reactivos y el protocolo. 4. Añadir 2 ml de tampón de tinción [p. ej., tinción BD Pharmingen™ (FBS), n.º de cat. 554656 o tinción BD Pharmingen™ (BSA), n.º de cat. 554657] a los tubos o el volumen necesario a los pocillos de la placa. 5. Lave las partículas centrifugando los tubos o la placa durante 5 minutos a 500 × g y aspire inmediatamente los sobrenadantes para minimizar la pérdida de partículas, teniendo cuidado de no alterar el pellet. Lave dos veces repitiendo los pasos 4 y 5 dejando aproximadamente 50 µL de sobrenadante en el tubo después de cada aspiración. Nota: • Para obtener mejores resultados de señal a ruido, utilice un aspirador de vacío y aspire el sobrenadante con una punta de pipeta fina. 6. Resuspenda el pellet agitando en vórtex y luego agregue 0,3-0,5 mL de tampón de tinción. 7. Adquiera las partículas de desmezcla y compensación BD™ SpectraComp™ utilizando la misma configuración del instrumento de parámetros de dispersión de luz frontal y lateral (FSC-A y SSC-A) utilizada para analizar las células. Se recomienda adquirir los datos inmediatamente después de la tinción. 8. Seleccione la población de microesferas singlete según las características de FSC (dispersión de luz frontal) y SSC (dispersión de luz lateral). 9. Para la compensación o la desmezcla espectral, utilice el protocolo adecuado para su sistema de citómetro. 10. Adquiera las muestras celulares para el experimento. Se recomienda probar las partículas de desmezcla y compensación BD™ SpectraComp™ para confirmar la precisión de la compensación o la desmezcla espectral.
Avisos del producto: Consulte los protocolos técnicos en www.bdbiosciences.com/us/s/resources. Todas las proteínas séricas provienen de mataderos inspeccionados por el USDA ubicados en Estados Unidos. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico, altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Este producto fue desarrollado y fabricado por Slingshot Biosciences, Inc., Emeryville, CA.