BD, 570908, Kit de tampón de conservación de muestras BD® OMICS-Guard

Aplicación: Experimentos multiómicos de células individuales en la plataforma BD Rhapsody™ (probado durante el desarrollo)
Estado regulatorio: RUO
Descripción: El tampón de conservación de muestras BD® OMICS-Guard es un reactivo único que preserva los epítopos de ARNm y proteínas de muestras biológicas sin el uso de fijadores agresivos ni reticulación tradicional. Está comprobado que el tampón BD® OMICS-Guard preserva muestras biológicas para estudios proteómicos y transcriptómicos, permitiendo la detección de dianas proteicas de superficie o intracelulares sin comprometer los datos de secuenciación de ARN unicelular. El tampón BD® OMICS-Guard puede usarse como producto independiente para conservar células aisladas, sangre completa y tejidos a granel hasta 72 horas a 4 °C antes de muchas aplicaciones unicelulares (véase más adelante), o junto con el kit de tampón AbSeq intracelular BD Rhapsody™, que permite almacenar las células hasta 24 horas a 4 °C antes de la permeabilización. Para uso independiente, sin necesidad de combinarlo con el kit de tampón AbSeq intracelular BD Rhapsody™, las muestras conservadas pueden procesarse y utilizarse para citometría de flujo o para diversos flujos de trabajo multiómicos de células individuales, como el análisis del transcriptoma completo, el análisis de genes específicos o la determinación de perfiles de longitud completa de TCR/BCR. Para obtener una lista actualizada de las aplicaciones compatibles, contacte con su Científico de Aplicaciones de Campo (FAS) local. También existe la opción de añadir perfiles de proteínas de superficie celular a estos ensayos utilizando reactivos BD® AbSeq Antibody-Oligo. La tinción con BD® AbSeq Antibody-Oligos es flexible, ya que las células pueden teñirse antes o después de la conservación. Si la tinción con BD® AbSeq se realiza después de la conservación, se requiere la adición del potenciador BD® AbSeq para un rendimiento óptimo. Para usar con el kit de tampón AbSeq intracelular BD Rhapsody™ para detectar ARNm y proteínas intracelulares, las células preservadas se pueden permeabilizar de manera segura con el tampón Perm del kit de tampón AbSeq intracelular BD Rhapsody™ sin riesgo de perder moléculas intracelulares, mientras que al mismo tiempo se permite que los oligonucleótidos de anticuerpos BD® AbSeq intracelulares accedan al interior de la célula.
Preparación y almacenamiento: Conservar todos los componentes del kit entre 2 y 8 °C. No congelar.
Procedimientos de ensayo recomendados: Procedimientos de ensayo recomendados Contiene: Albúmina de suero bovino (BSA). Utilice protocolos de seguridad de laboratorio estándar. Lea y comprenda las hojas de datos de seguridad (SDS) antes de manipular productos químicos. Para obtener las SDS, vaya a regdocs.bd.com o comuníquese con el soporte técnico de BD Biosciences en scomix@bd.com. Advertencia: Todas las muestras biológicas y los materiales que entran en contacto con ellas se consideran biopeligrosos. Manipule como si pudieran transmitir infecciones y deséchelos con las precauciones adecuadas de acuerdo con las regulaciones federales, estatales y locales. Nunca pipetee con la boca. Use ropa protectora, gafas y guantes adecuados. Para el ensayo CITE-seq intracelular Agregue el tampón de conservación de muestras BD® OMICS-Guard a las células sedimentadas y resuspenda suavemente las células pipeteando. Conserve las células a 2-8 °C durante 5 minutos a 24 horas para usar con el ensayo CITE-seq intracelular utilizando el protocolo BD® AbSeq. Después de la conservación, utilice una centrífuga de cubeta oscilante, sedimente las células a 800 × g durante 5 minutos a 4 °C. Retire y deseche con cuidado el sobrenadante sin alterar el sedimento. Consulte el protocolo 23-24464 del sistema BD Rhapsody™ de etiquetado de células individuales con BD® AbSeq Ab-Oligos para CITE-seq intracelular para obtener detalles del flujo de trabajo recomendado. Para uso independiente I. Suspensión de células individuales Uso recomendado 10^4 a 10^7 células por 1 mL de tampón BD® OMICS-Guard Protocolo de conservación de muestras Recoja células individuales/células individuales disociadas en suspensión y centrifugue a 400 × g durante 5 minutos. 1. Deseche el sobrenadante y resuspenda las células en el tampón BD® OMICS-Guard como se recomienda anteriormente. Nota: Manipule los tubos/botella que contienen el tampón en condiciones asépticas. Las células se pueden almacenar en tubos Eppendorf® o equivalentes. 2. Coloque las células a 4 °C durante un máximo de 72 horas. 3. Después del almacenamiento, centrifugue las células a 800 × g durante 5 minutos y deseche el sobrenadante para eliminar el tampón BD® OMICS-Guard. No se requiere ningún lavado adicional. 4. Resuspenda las células en el tampón deseado para aplicaciones posteriores. II. Tejido Uso recomendado 30 a 50 mg de tejido por 20 ml de tampón BD® OMICS-Guard Protocolo de conservación de muestras 1. Seccione los tejidos en trozos y colóquelos inmediatamente en el tampón BD® OMICS-Guard. Nota: Manipule los tubos/botellas que contienen el tampón en condiciones asépticas. 2. Coloque las células a 4 °C durante un máximo de 72 horas. 3. Después del almacenamiento, disocie el tejido mediante el método deseado para la aplicación de células individuales, centrifugue las células a 800 × g durante 5 minutos y deseche el sobrenadante para eliminar el tampón BD® OMICS-Guard. No se requiere ningún lavado adicional. 4. Resuspenda las células en el tampón deseado para aplicaciones posteriores. III. Sangre completa Uso recomendado Relación 1:1 de sangre completa (con EDTA) y tampón BD® OMICS-Guard Protocolo de conservación de muestras 1. Recoja sangre completa usando EDTA como anticoagulante y mézclela con el mismo volumen de tampón BD® OMICS-Guard invirtiéndola 10 veces. Nota: Es posible usar otros anticoagulantes, aunque no han sido probados. 2. Coloque la mezcla de sangre completa y tampón BD® OMICS-Guard a 4 °C durante un máximo de 72 horas. 3. Después del almacenamiento, use un kit magnético de depleción de glóbulos rojos para eliminar los glóbulos rojos y aislar las PBMC y los granulocitos. 4. Centrifugue las células aisladas a 200 × g durante 7 minutos para sedimentar las células nucleadas y eliminar el sobrenadante que contiene plaquetas. 5. Resuspenda los leucocitos en el tampón deseado para aplicaciones posteriores. Para aplicaciones CITE-seq con oligonucleótidos de anticuerpos BD® AbSeq DESPUÉS de la conservación de la muestra, se recomienda encarecidamente el uso del kit potenciador BD® AbSeq (n.° de cat. 570750). Los potenciadores BD® AbSeq pueden añadirse al paso del reactivo BD Fc Block™ o usarse por separado antes de la tinción de células individuales con oligonucleótidos de anticuerpos BD® AbSeq. Nota: La tinción con oligonucleótidos de anticuerpos BD® AbSeq ANTES de la conservación de la muestra o la tinción con el kit de multiplexación de células individuales BD® SOLO después de la conservación de la muestra no requiere el uso del kit potenciador BD® AbSeq. Protocolo de tinción para suspensiones celulares (puede incluir células de tejidos o sangre completa) 1. Prepare el reactivo Human BD Fc Block™ de la siguiente manera: Componente Volumen/muestra (µL) Volumen/muestra con sobrante (µL) Tampón de tinción 65 78 Reactivo Human BD Fc Block™ 5 6 Total 70 84 2. A la mezcla de 70 µL de reactivo Human BD Fc Block™, agregue 10 µL de cada uno de los tres potenciadores BD® AbSeq para un volumen total agregado de 30 µL. Nota: La mezcla de reactivo Human BD Fc Block™ y potenciadores BD® AbSeq debe tener un volumen final de 100 µL. 3. A las células sedimentadas, agregue 100 µL de mezcla final de Fc Block/AbSeq Enhancer y resuspenda el sedimento celular. 4. Incubar las células a temperatura ambiente durante 10 minutos. 5. Añadir los cócteles de anticuerpos y oligonucleótidos BD® AbSeq según los protocolos estándar de tinción AbSeq (100 µL de mezcla maestra de marcaje de anticuerpos y oligonucleótidos BD® AbSeq 2X, incubar de 30 a 60 minutos en hielo). Consulte el protocolo de marcaje de células individuales del sistema BD Rhapsody™ con oligonucleótidos BD® AbSeq (1 plex a 40 plex) (ID de documento: 23-24262). 6. Para los usuarios del sistema de análisis de células individuales BD Rhapsody™, ampliar el tiempo de lisis en el flujo de trabajo de captura de células individuales de 2 a 5 minutos para obtener resultados óptimos en células, tejidos o sangre completa previamente conservada en el tampón BD® OMICS-Guard.
Avisos del producto: Para conocer las patentes estadounidenses aplicables, consulte bd.com/patents. Todas las proteínas séricas provienen de mataderos inspeccionados por el USDA ubicados en Estados Unidos.