BD, 570911, tampón de conservación de muestras BD® OMICS-Guard

Preparación y almacenamiento: Conservar todos los componentes del kit a una temperatura de 2 a 8 °C. No congelar. Para evitar la contaminación del producto, se recomienda preparar alícuotas de un solo uso en una cabina de bioseguridad al abrir el frasco por primera vez.
Procedimientos de ensayo recomendados: Procedimientos de ensayo recomendados Contiene: Albúmina de suero bovino (BSA). Utilice protocolos de seguridad de laboratorio estándar. Lea y comprenda las hojas de datos de seguridad (SDS) antes de manipular productos químicos. Para obtener las SDS, vaya a regdocs.bd.com o comuníquese con el soporte técnico de BD Biosciences en scomix@bd.com. Advertencia: Todas las muestras biológicas y los materiales que entran en contacto con ellas se consideran biopeligrosos. Manipule como si pudieran transmitir infecciones y deséchelos con las precauciones adecuadas de acuerdo con las regulaciones federales, estatales y locales. Nunca pipetee con la boca. Use ropa protectora, gafas y guantes adecuados. Para el ensayo CITE-seq intracelular Agregue el tampón de conservación de muestras BD® OMICS-Guard a las células sedimentadas y resuspenda suavemente las células pipeteando. Conserve las células a 2-8 °C durante 5 minutos a 24 horas para usar con el ensayo CITE-seq intracelular utilizando el protocolo BD® AbSeq. Después de la conservación, utilice una centrífuga de cubeta oscilante, sedimente las células a 800 × g durante 5 minutos a 4 °C. Retire y deseche con cuidado el sobrenadante sin alterar el sedimento. Consulte el protocolo 23-24464 del sistema BD Rhapsody™ de etiquetado de células individuales con BD® AbSeq Ab-Oligos para CITE-seq intracelular para obtener detalles del flujo de trabajo recomendado. Para uso independiente I. Suspensión de células individuales Uso recomendado 10^4 a 10^7 células por 1 mL de tampón BD® OMICS-Guard Protocolo de conservación de muestras Recoja células individuales/células individuales disociadas en suspensión y centrifugue a 400 × g durante 5 minutos. 1. Deseche el sobrenadante y resuspenda las células en el tampón BD® OMICS-Guard como se recomienda anteriormente. Nota: Manipule los tubos/botella que contienen el tampón en condiciones asépticas. Las células se pueden almacenar en tubos Eppendorf® o equivalentes. 2. Coloque las células a 4 °C durante un máximo de 72 horas. 3. Después del almacenamiento, centrifugue las células a 800 × g durante 5 minutos y deseche el sobrenadante para eliminar el tampón BD® OMICS-Guard. No se requiere ningún lavado adicional. 4. Resuspenda las células en el tampón deseado para aplicaciones posteriores. II. Tejido Uso recomendado 30 a 50 mg de tejido por 20 ml de tampón BD® OMICS-Guard Protocolo de conservación de muestras 1. Seccione los tejidos en trozos y colóquelos inmediatamente en el tampón BD® OMICS-Guard. Nota: Manipule los tubos/botellas que contienen el tampón en condiciones asépticas. 2. Coloque las células a 4 °C durante un máximo de 72 horas. 3. Después del almacenamiento, disocie el tejido mediante el método deseado para la aplicación de células individuales, centrifugue las células a 800 × g durante 5 minutos y deseche el sobrenadante para eliminar el tampón BD® OMICS-Guard. No se requiere ningún lavado adicional. 4. Resuspenda las células en el tampón deseado para aplicaciones posteriores. III. Sangre completa Uso recomendado Relación 1:1 de sangre completa (con EDTA) y tampón BD® OMICS-Guard Protocolo de conservación de muestras 1. Recoja sangre completa usando EDTA como anticoagulante y mézclela con el mismo volumen de tampón BD® OMICS-Guard invirtiéndola 10 veces. Nota: Es posible usar otros anticoagulantes, aunque no han sido probados. 2. Coloque la mezcla de sangre completa y tampón BD® OMICS-Guard a 4 °C durante un máximo de 72 horas. 3. Después del almacenamiento, use un kit magnético de depleción de glóbulos rojos para eliminar los glóbulos rojos y aislar las PBMC y los granulocitos. 4. Centrifugue las células aisladas a 200 × g durante 7 minutos para sedimentar las células nucleadas y eliminar el sobrenadante que contiene plaquetas. 5. Resuspenda los leucocitos en el tampón deseado para aplicaciones posteriores. Para aplicaciones CITE-seq con oligonucleótidos de anticuerpos BD® AbSeq DESPUÉS de la conservación de la muestra, se recomienda encarecidamente el uso del kit potenciador BD® AbSeq (n.° de cat. 570750). Los potenciadores BD® AbSeq pueden añadirse al paso del reactivo BD Fc Block™ o usarse por separado antes de la tinción de células individuales con oligonucleótidos de anticuerpos BD® AbSeq. Nota: La tinción con oligonucleótidos de anticuerpos BD® AbSeq ANTES de la conservación de la muestra o la tinción con el kit de multiplexación de células individuales BD® SOLO después de la conservación de la muestra no requiere el uso del kit potenciador BD® AbSeq. Protocolo de tinción para suspensiones celulares (puede incluir células de tejidos o sangre completa) 1. Prepare el reactivo Human BD Fc Block™ de la siguiente manera: Componente Volumen/muestra (µL) Volumen/muestra con sobrante (µL) Tampón de tinción 65 78 Reactivo Human BD Fc Block™ 5 6 Total 70 84 2. A la mezcla de 70 µL de reactivo Human BD Fc Block™, agregue 10 µL de cada uno de los tres potenciadores BD® AbSeq para un volumen total agregado de 30 µL. Nota: La mezcla de reactivo Human BD Fc Block™ y potenciadores BD® AbSeq debe tener un volumen final de 100 µL. 3. A las células sedimentadas, agregue 100 µL de mezcla final de Fc Block/AbSeq Enhancer y resuspenda el sedimento celular. 4. Incubar las células a temperatura ambiente durante 10 minutos. 5. Añadir los cócteles de anticuerpos y oligonucleótidos BD® AbSeq según los protocolos estándar de tinción AbSeq (100 µL de mezcla maestra de marcaje de anticuerpos y oligonucleótidos BD® AbSeq 2X, incubar de 30 a 60 minutos en hielo). Consulte el protocolo de marcaje de células individuales del sistema BD Rhapsody™ con oligonucleótidos BD® AbSeq (1 plex a 40 plex) (ID de documento: 23-24262). 6. Para los usuarios del sistema de análisis de células individuales BD Rhapsody™, ampliar el tiempo de lisis en el flujo de trabajo de captura de células individuales de 2 a 5 minutos para obtener resultados óptimos en células, tejidos o sangre completa previamente conservada en el tampón BD® OMICS-Guard.
Avisos del producto: Para conocer las patentes estadounidenses aplicables, consulte bd.com/patents. Todas las proteínas séricas provienen de mataderos inspeccionados por el USDA ubicados en Estados Unidos.