BD, 571606, Kit de apoptosis de caspasa-3 activa FITC de BD Pharmingen™

Reactividad: Humana (prueba de control de calidad), Ratón (probado en desarrollo)
Estado regulatorio: RUO
Descripción: Descripción El C92-605.rMAb es un anticuerpo monoclonal recombinante derivado de células de hibridoma C92-605. Este anticuerpo reconoce específicamente la forma activa de la Caspasa-3 en células humanas y de ratón. No se ha informado que reconozca la forma proenzimática de la Caspasa-3. La familia de las cisteína proteasas de las caspasas desempeña un papel crucial en la apoptosis y la inflamación. La Caspasa-3 es una proteasa clave que se activa durante las primeras etapas de la apoptosis y, al igual que otros miembros de la familia de las caspasas, se sintetiza como una proenzima inactiva que se procesa en las células que experimentan apoptosis por autoproteólisis y/o escisión por otra proteasa. Las formas procesadas de las caspasas consisten en subunidades grandes (17-22 kDa) y pequeñas (10-12 kDa) que se asocian para formar una enzima activa. La caspasa-3 activa, un marcador de células en apoptosis, consiste en un heterodímero de subunidades de 17 y 12 kDa derivado de la proenzima de 32 kDa. La caspasa-3 activa escinde y activa proteolíticamente otras caspasas, así como dianas relevantes en el citoplasma, p. ej., D4-GDI y Bcl-2, y en el núcleo (p. ej., PARP). El kit BD Pharmingen™ FITC Active Caspase-3 Apoptosis es una herramienta valiosa para estudiar el papel de la caspasa-3 activa en la apoptosis. El kit proporciona un protocolo y reactivos para la fijación, permeabilización y tinción inmunofluorescente de células para el análisis por citometría de flujo de sus niveles intracelulares expresados ​​de caspasa-3 activa, implicados en la muerte celular programada.
Preparación y almacenamiento: El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad. El anticuerpo se conjugó con el colorante en condiciones óptimas y se eliminaron el anticuerpo no conjugado y el colorante libre. Conservar sin diluir a 4 °C y protegido de la luz. No congelar.
Procedimientos de ensayo recomendados: Procedimientos de ensayo recomendados Inducción de apoptosis por camptotecina Materiales 1. Prepare una solución madre de camptotecina 1,0 mM (Sigma-Aldrich, Cat. No. C-9911) en DMSO. La camptotecina, un extracto del árbol chino Camptotheca acuminata, es un potente inhibidor de la topoisomerasa I, una molécula necesaria para la síntesis de ADN. Se ha informado que la camptotecina induce apoptosis de manera dependiente de la dosis in vitro. 2. Células Jurkat (leucemia de células T humanas; ATCC® TIB-152™). Nota: Los timocitos de ratón u otros tipos de células o líneas celulares pueden tratarse de manera similar cultivando un agente que induce apoptosis como la dexametasona, como se muestra. Procedimiento 1. Agregue camptotecina (concentración final de 4-6 µM) a 1 × 10^6 /ml de células Jurkat en proliferación. 2. Incubar las células durante 4 horas a 37 °C. Protocolo de tinción de caspasa-3 activa Procedimiento 1. Determinar la cantidad total de muestras experimentales (pruebas) y calcular la cantidad de tampón BD Perm/Wash™ (1×) y anticuerpo que necesitará para que cada prueba tenga 100 µl de tampón BD Perm/Wash™ (1×) y 20 µl de anticuerpo de la siguiente manera: N.º de pruebas N.º de células Vol. Perm/Wash™ (ml) Vol. de anticuerpo (μl) 1 1 × 10^6 0,1 20 5 5 × 10^6 0,5 100 10 10 × 10^6 1,0 200 20 20 × 10^6 2,0 400 2. Diluya la cantidad necesaria de tampón BD Perm/Wash™ (10×) 1:10 en agua destilada antes de usar. Nota: Ocasionalmente, puede observarse precipitado con el tampón BD Perm/Wash™ (10×), lo cual no afectará su rendimiento. El precipitado puede eliminarse filtrando la solución 1× a través de un filtro de 0,45 µm. 3. Lave las células dos veces con PBS frío 1× y, a continuación, resuspéndalas en la solución BD Cytofix/Cytoperm™ a una concentración de 1 × 10^6 células/0,5 ml. 4. Incube las células durante 20 min en hielo. 5. Sedimente las células, aspire y deseche la solución BD Cytofix/Cytoperm™; lave dos veces con el tampón BD Perm/Wash™ (1×) a un volumen de 0,5 ml de tampón/1 × 10^6 células a temperatura ambiente. 6. Resuspenda las células en el tampón BD Perm/Wash™ (1×) calculado anteriormente más el anticuerpo e incube durante 30 min a temperatura ambiente. 7. Lave cada prueba en 1,0 ml de tampón BD Perm/Wash™ (1×), luego resuspenda la prueba en 0,5 ml de tampón BD Perm/Wash™ (1×) y analice por citometría de flujo. Peligro: La solución de fijación y permeabilización Cytofix/Cytoperm (1X) (componente 51-6896KC) contiene 4,2 % de formaldehído. Indicaciones de peligro Nocivo si se inhala. Provoca irritación cutánea. Provoca lesiones oculares graves. Puede provocar una reacción alérgica en la piel. Se sospecha que provoca defectos genéticos. Puede causar cáncer. Vía de exposición: Inhalación. Puede causar irritación respiratoria. Consejos de precaución Use ropa protectora / protección ocular. Use guantes protectores. No respire la niebla/los vapores/el aerosol. EN CASO DE CONTACTO CON LOS OJOS: Aclare cuidadosamente con agua durante varios minutos. Quítese las lentes de contacto, si lleva y resulta fácil. Siga aclarando. Si se produce irritación o sarpullido en la piel: Consulte a un médico.
Avisos del producto: Avisos del producto Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para conocer los protocolos técnicos. La fuente de todas las proteínas séricas proviene de mataderos inspeccionados por el USDA ubicados en los Estados Unidos. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Este reactivo ha sido prediluido para su uso en el volumen recomendado por prueba. Normalmente usamos 1 × 10^6 células en una muestra experimental de 100 µl (una prueba). Para conocer los espectros de fluorocromo y la configuración adecuada del instrumento, consulte nuestra página web de citometría de flujo multicolor en www.bdbiosciences.com/colors. Se debe utilizar un control de isotipo a la misma concentración que el anticuerpo de interés. Es posible que la reactividad cruzada de especies detectada durante el desarrollo del producto no se haya confirmado en todos los formatos o aplicaciones. Consulte http://regdocs.bd.com para acceder a las fichas de datos de seguridad (FDS). Para conocer las patentes estadounidenses aplicables, consulte bd.com/patents.
Descripción: Cantidad/Tamaño: Número de pieza: ID de EntrezGene
N/D : 100.0 : N/D : N/D