BD, 572179, Panel de proteínas de células B BD® OMICS-One

Reactividad: Humana (Probada en desarrollo)
Solicitud: Secuenciación de 3' de células individuales (calificada)
Estado regulatorio: RUO
Tampón de almacenamiento: polvo liofilizado que contiene BSA y ≤ 0,25 % de azida sódica.
Descripción: El panel de proteínas de células B BD® OMICS-One consta de 30 especificidades diferentes contra los principales marcadores de células B en un solo tubo. Diseñado y optimizado para funcionar en el sistema BD Rhapsody™, el panel de proteínas de células B se ha probado para funcionar a la perfección con el ensayo de análisis del transcriptoma completo (WTA) BD Rhapsody™, el ensayo de ARNm dirigido, el kit de multiplexación de células individuales BD® (SMK), el ensayo CITE-seq intracelular BD® (IC-AbSeq) y el ensayo multiómico TCR/BCR Next BD Rhapsody™ para humanos. Cada anticuerpo individual se conjugó con un oligonucleótido que contiene una secuencia de código de barras de anticuerpo específica flanqueada por una cola de poliA en el extremo 3' y un asa de PCR común (sitio de unión del cebador de PCR) en el extremo 5'. Todas las secuencias de código de barras AbSeq se generaron in silico con una similitud mínima con los genomas humanos, presentan una estructura secundaria predicha baja y una distancia de Hamming alta dentro del portafolio de anticuerpos-oligos de BD®, lo que permite la corrección de errores de secuenciación y un mapeo único. La cola de poliA del oligonucleótido permite que la secuencia de código de barras sea capturada por las perlas de captura celular mejoradas BD Rhapsody™. El asa de PCR de 5' permite una generación eficiente de bibliotecas de secuenciación para diversas plataformas de secuenciación. Cada anticuerpo individual se encuentra en una concentración óptima dentro del plexo de 30, lo que permite una resolución superior tanto del objetivo como de la población. El panel de proteínas de células B está diseñado con tecnología SMART. Esta tecnología ayuda a reducir el coste de secuenciación y a aumentar la resolución de los datos al atenuar los anticuerpos dirigidos a marcadores primarios de alta expresión y al permitir la reasignación de lecturas de secuenciación a marcadores expresados ​​a niveles más bajos. Con la tecnología SMART, los marcadores de baja expresión pueden cuantificarse sin necesidad de realizar una secuenciación más profunda ni incurrir en un coste elevado. Las dos especificidades atenuadas en el panel de células B son CD23 y HLA-DR.
Preparación y almacenamiento: Conservar a 2-8 °C y protegido de la luz. No congelar.
Procedimientos de ensayo recomendados: Este reactivo se proporciona liofilizado en un formato pretitulado. 1. Retire el tubo BD® OMICS-One B-Cell Protein Panel de la bolsa de aluminio y deje que alcance la temperatura ambiente durante 5 minutos. 2. Asegúrese de que el pellet se encuentre en el fondo del tubo. De lo contrario, centrifugue brevemente para recoger el contenido en el fondo del tubo. 3. Añada 35 µL de agua libre de nucleasas al fondo del tubo y deje que los anticuerpos se reconstituyan durante 5 minutos a temperatura ambiente. 4. Transfiera los anticuerpos reconstituidos a hielo hasta que las células estén listas para la tinción. Nota: Reconstituya los anticuerpos inmediatamente antes de la tinción celular. La incubación prolongada del anticuerpo reconstituido podría aumentar el fondo no específico. 5. Para la prueba drop-in de BD® AbSeq Ab-Oligo de 60 plex o menos, prepare la MasterMix de etiquetado de BD® AbSeq siguiendo el procedimiento de las dos tablas siguientes en un tubo LoBind de 1,5 ml con hielo. Nota: Para pruebas drop-in con más de 60 plex, contacte con el soporte técnico para realizar el cálculo. Para el etiquetado secuencial con etiquetas de muestra o sin etiquetas de muestra, prepare la mezcla maestra de etiquetado BD® AbSeq para drop-ins de la siguiente manera: ____________________________________________________________________________________________ Componente 1 muestra (µL) 1 muestra + 2 muestras + 30 % de exceso (µL) 30 % de exceso (µL) Por BD® AbSeq Ab-Oligo 2,0 2,6 5,2 Total de BD® AbSeq Ab-Oligo 2,0 × N* 2,6 × N 5,2 × N FBS † (número de catálogo 554656) 140 – (2,0 x N) 182 – (2,6 x N) 364 – (5,2 x N) Total 140 182 364 Para el etiquetado conjunto con etiquetas de muestra, prepare la mezcla maestra de etiquetado BD® AbSeq para drop-ins de la siguiente manera: ____________________________________________________________________________________________ Componente 1 muestra (µL) 1 muestra + 2 muestras + 30% de exceso (µL) 30% de exceso (µL) Por BD® AbSeq Ab-Oligo 2,0 2,6 5,2 Total de BD® AbSeq Ab-Oligo 2,0 × N* 2,6 × N 5,2 × N FBS † (número de catálogo 554656) 120 – (2,0 × N) 156 – (2,6 × N) 312 – (5,2 × N) Total 120 156 312 * N = número de anticuerpos de inserción directa. N = 0 si no hay anticuerpos de inserción directa. † FBS = tampón de tinción BD Pharmingen™. 6. Pipetee la mezcla maestra de etiquetado BD® AbSeq para gotas. Centrifugue brevemente para recoger el contenido en el fondo y vuelva a colocarla en hielo. 7. Para el etiquetado secuencial con o sin etiquetas de muestra, añada 140 µL de la mezcla maestra de etiquetado BD® AbSeq de gotas al tubo que contiene 35 µL de solución reconstituida del panel de proteínas de células B para completar un volumen total de 175 µL por cada muestra. Para el coetiquetado con etiquetas de muestra, añada 120 µL de la mezcla maestra de etiquetado BD® AbSeq de gotas y 20 µL de etiqueta de muestra al tubo que contiene 35 µL de solución reconstituida del panel de proteínas de células B para completar un volumen total de 175 µL por cada muestra. 8. Pipetee la mezcla, centrifugue brevemente para recoger el contenido en el fondo del tubo y vuelva a colocarla en hielo. 9. Centrifugue las células a 400 × g durante 5 minutos. Si utiliza el Bloque Fc, continúe con el paso 10. De lo contrario, vaya al paso 11. 10. (Opcional) Para muestras que contengan linfocitos mieloides y linfocitos B, BD Biosciences recomienda bloquear las señales de falsos positivos mediadas por el receptor Fc inespecífico con el Bloque Fc Humano BD (número de catálogo 564220). Para realizar el bloqueo, pipetee el Fc Block MasterMix en un tubo LoBind nuevo de 1,5 mL en hielo: _________________________________________________________________________________ Componente 1 muestra (µL)* 1 muestra + 20 % de exceso (µL) FBS† (número de catálogo 554656) 20,0 24,0 Fc Block‡ (número de catálogo 564220) 5,0 6,0 Total 25,0 30,0 * Suficiente para hasta 1 millón de células. Para bloquear más células, ajuste el volumen. † FBS = tampón de tinción BD Pharmingen™. ‡ Fc Block = BD Pharmingen™ Human BD Fc Block. b. Pipetee y mezcle el Fc Block MasterMix y centrifugue brevemente. Coloque en hielo. c. Retire el sobrenadante de las células sin alterar el sedimento. d. Resuspenda las células en 25 µL de Fc Block MasterMix. e. Incube las células a temperatura ambiente (15 °C a 25 °C) durante 10 minutos. f. Añada 175 µL de BD® AbSeq labeling MasterMix del paso 8 a la suspensión celular. Pipetee y mezcle y continúe con el paso 12. 11. Retire el sobrenadante de las células sin alterar el pellet. Añada 25 µL de tampón de tinción (FBS) a los 175 µL de BD® AbSeq labeling MasterMix del paso 8 para completar un volumen total de 200 µL. Resuspenda el pellet celular en un volumen total de 200 µL. Pipetee y mezcle. 12. Transfiera las células con BD® AbSeq labeling MasterMix a un nuevo tubo Falcon de poliestireno de 5 mL. 13. Teñir las células en hielo durante 30 minutos. 14. Añada 3-4 mL de tampón de tinción (FBS) a las células marcadas y mezcle con la pipeta. 15. Centrifugue a 400 × g durante 5 minutos. 16. Destape el tubo e inviértalo para decantar el sobrenadante en residuos biopeligrosos. Mantenga el tubo invertido y seque suavemente con una toallita sin pelusa para eliminar el sobrenadante residual del borde del tubo. 17. Repita los pasos 14-16 dos veces más para un total de 3 lavados. 18. Resuspenda el sedimento celular lavado final en 620 µL de tampón de muestra frío del reactivo de cartucho mejorado BD Rhapsody™ V3 (número de catálogo 667052) y proceda a la captura de células individuales con los pasos de lavado en el cartucho descritos a continuación. Consulte el Protocolo de Captura de Células Individuales y Síntesis de ADNc del Sistema de Análisis de Células Individuales BD Rhapsody™ HT (Doc ID 23-24252) o el Protocolo de Captura de Células Individuales y Síntesis de ADNc del Sistema BD Rhapsody™ HT Xpress (Doc ID 23-24253) para obtener más información. Nota: Realice el lavado en el cartucho después de la sedimentación celular (incubación de 8 minutos) de la siguiente manera: a) En la sección del protocolo "Carga de células en el Cartucho de 8 Carriles BD Rhapsody™", después de la carga celular, incube el cartucho en oscuridad a temperatura ambiente durante 8 minutos. b) Coloque el cartucho en el BD Rhapsody™ HT Xpress y realice los siguientes pasos: _____________________________________________________________ Material a cargar Volumen (µL) 1 carril Modo Pipeta Aire 380 Cebado/Lavado Buffer de muestra fría 380 Cebado/Lavado Aire 380 Cebado/Lavado Buffer de muestra fría 380 Cebado/Lavado c) (Opcional) Realice el paso del escáner: Escaneo de carga celular, si utiliza el Protocolo de captura de células individuales y síntesis de ADNc del sistema de análisis de células individuales BD Rhapsody™ HT (ID de documento 23-24252). No es necesario un retraso de 8 minutos antes del escaneo. Advertencia: Todas las muestras y materiales biológicos se consideran biopeligrosos. Manéjelos como si fueran capaces de transmitir infecciones y deséchelos utilizando las precauciones adecuadas de acuerdo con las regulaciones federales, estatales y locales. Nunca pipetee con la boca. Use ropa, gafas y guantes de protección adecuados. Lista de las 30 especificidades AbSeq humanas incluidas en el panel de células B BD® OMICS-One: _____________________________________________________________________________ Especificidad Clon Oligo ID Código de barras BD® AbSeq Secuencia CD20 2H7 AHS0008 TTGCTTGTTGCGCGTTAGAGAGTATGTCGGGAGATG CD275 2D3/B7-H2 AHS0011 GTTTATATGTACGACGCCCGGTTGACGAGTGGAAGT CD38 HIT2 AHS0022 GTCAACGATGGGTAGCGGTAGAAATAACGGAACTGG CD95 DX2 AHS0023 GGCCCGTTAGAGTTGGTATCCGTATGAAGGTTAGCT CD27 M-T271 AHS0025 TGTCCGGTTTAGCGAATTGGGTTGAGTCACGTAGGT CD19 SJ25C1 AHS0030 TAGTAATGTGTTCGTAGCCGGTAATAATCTTCGTGG HLA-DR G46-6 AHS0035 TGTTGGTTATTCGTTAGTGCATCCGTTTGGGCGTGG CD185 (CXCR5) RF8B2 AHS0039 AGGAAGGTCGATTGTATAACGCGGCATTGTAACGGC CD24 ML5 AHS0042 ACTTTGGGTTGAGCGCATGATTATTCGTGACACTTT CD80 L307.4 AHS0046 GAGGGTAACGGGTGTCCAAATATCGGCTGTGTAAGT CD5 UCHT2 AHS0047 ACGAAGCGAGCGAAGAACCTATGCGATTGAGTAAGT CD10 HI10a AHS0051 CCTGTTTGATGCGTACGGAGATTTAGCGGATTTATG IgD IA6-2 AHS0058 TGAGGGATGTATAGCGAGAATTGCGACCGTAGACTT IgG G18-145 AHS0059 AGGTAGGTTATCGTAGGGTAGACTTAGCGGGCATTG CD184 (CXCR4) 12G5 AHS0060 CAGTGTTTAGAGCGGGTTGCATATGTCGTTTAGAGG CD34 581 AHS0061 TGGGTGTATTACGGTTAGTTTATGCGCGAAGGTGTT CD21 B-ly4 AHS0074 GTATTCGCGTATTGTCAGTCGGTAGGGTTATGGTCT CD9 M-L13 AHS0082 GGGTTGTAAGTCGTCGGAAGTGTGAAGCGTATAGTG CD126 M5 AHS0096 AATGGTGAATCGCCCTAGCAAGTGGTATCGGAATCG CD30 BERH8 AHS0114 CCAGTGTAGATTGAGCCGTCGATTTAGTTAGCAGTG CD40 5C3 AHS0117 GGTGTAATTGGGCTAGAACGTATATGCGGTAAGGCG CD138 MI15 AHS0121 TAAGCTGCCGGTATTGGAAACGTATCGATCTATTGG CD79B CB3-1 AHS0153 CATCATGAGTAGTTGCTTCGGCGAGTAGGTTTAATT CD22 HIB22 AHS0195 TGGTTCGTGACTGTATAGGCTTAGCTTAGGCAATTT IgM G20-127 AHS0198 TTTGGAGGGTAGCTAGTTGCAGTTCGTGGTCGTTTC CD43 1G10 AHS0200 ATGGCGGATGGATTTGTCGGTGATATTGCTCTCGTT CD268 (BAFF-R) 11C1 AHS0206 TGTGAATGAGTTAAGCGTCGCGGATATGTAGAGCCT CD23 EBVCS-5 AHS0210 TTTGATGTGGGCGGGTTGTATTACGGTTTCGAGTCT CD73 AD2 AHS0216 AAAGTAGGGTCGATCAAGGGAGTTAACGGTAGCGCT CD1d CD1d42 AHS0219 GTTAGGATTATTGACGTACCGAGTTAGGAGTGATTG
Avisos del producto: Avisos del producto Este reactivo se proporciona liofilizado en un formato pretitulado. Consulte https://www.bdbiosciences.com/en-us/resources/protocols/single-cell-multiomics para conocer los protocolos técnicos. El proceso de producción se sometió a rigurosas pruebas y validación para garantizar que genera un conjugado de alta calidad con un rendimiento consistente y una actividad de unión específica. Sin embargo, no se han realizado pruebas de verificación en todos los lotes de conjugado. Vaya a https://abseq-ref-gen.genomics.bd.com/ para acceder a los archivos de referencia de AbSeq en formato FASTA para análisis bioinformáticos. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Siga las pautas estatales y locales al desechar residuos peligrosos. La fuente de todas las proteínas séricas proviene de mataderos inspeccionados por el USDA ubicados en los Estados Unidos. Para consultar las patentes estadounidenses aplicables, consulte bd.com/patents. Consulte http://regdocs.bd.com para acceder a las fichas de datos de seguridad (FDS).