BD, 610523, BD Transduction Laboratories™ Anti-calnexina de ratón purificada

Reactividad: Humano (prueba de control de calidad), ratón, rata, perro (probado en desarrollo)
Isotipo: IgG1 de ratón
Inmunógeno: Calnexina humana aa. 116-301
Aplicación: Western blot (probado rutinariamente), bioimagen, inmunohistoquímica, inmunoprecipitación (probado durante el desarrollo)
Peso molecular objetivo: 90 kDa
Concentración: 250 µg/ml
ID de registro: AB_397883
Tampón de almacenamiento: solución tamponada acuosa que contiene BSA, glicerol y ≤0,09 % de azida sódica.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: Conservar sin diluir a -20 °C. El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad.
Procedimientos de ensayo recomendados: Bioimagen: Para obtener información más detallada, consulte http://www.bdbiosciences.com/support/resources/protocols/ceritifed_reagents.jsp. A continuación, se presenta un protocolo abreviado: 1. Sembrar las células en un medio de cultivo adecuado a una concentración de aproximadamente 10 000 células por pocillo en una placa de imágenes BD Falcon™ de 96 pocillos (n.º de cat. 353219) y cultivar durante la noche. 2. Retirar el medio de cultivo de los pocillos y fijar las células añadiendo 100 μl de tampón de fijación BD Cytofix™ (n.º de cat. 554655) a cada pocillo. Incubar durante 10 minutos a temperatura ambiente (TA). 3. Retire el fijador de los pocillos y permebilice las células con BD Phosflow™ Perm Bufer III, metanol al 90 % o Triton™ X-100: a. Añada 100 μl de Perm Buffer III (n.º de cat. 558050) o metanol al 90 % refrigerado a -20 °C a cada pocillo e incube durante 5 minutos a temperatura ambiente. O b. Añada 100 μl de Triton™ X-100 al 0,1 % a cada pocillo e incube durante 5 minutos a temperatura ambiente. 4. Retire el tampón de permeabilización y lave los pocillos dos veces con 100 μl de PBS 1×. 5. Retire el PBS y bloquee las células añadiendo 100 μl de tampón de tinción BD Pharmingen™ (FBS) (n.º de cat. 554656) a cada pocillo. Incubar durante 30 minutos a temperatura ambiente. 6. Retirar el tampón de bloqueo y añadir 50 μl del anticuerpo primario titulado óptimamente (diluido en tampón de tinción) a cada pocillo e incubar durante 1 hora a temperatura ambiente. 7. Retirar el anticuerpo primario y lavar los pocillos tres veces con 100 μl de PBS 1×. 8. Retirar el PBS y añadir el reactivo del segundo paso a su concentración titulada óptimamente en 50 μl a cada pocillo e incubar en oscuridad durante 1 hora a temperatura ambiente. 9. Retirar el reactivo del segundo paso y lavar los pocillos tres veces con 100 μl de PBS 1×. 10. Retire el PBS y realice una contratinción de los núcleos añadiendo 200 μl por pocillo de 2 μg/ml de Hoechst 33342 (p. ej., Sigma-Aldrich, n.º de cat. B2261) en PBS 1× a cada pocillo al menos 15 minutos antes de la adquisición de la imagen. 11. Observe y analice las células en un instrumento de adquisición de imagen adecuado. Western blot: Para obtener más información, consulte http://www.bdbiosciences.com/pharmingen/protocols/Western_Blotting.shtml
Avisos del producto: Avisos del producto. Dado que las aplicaciones varían, cada investigador debe titular el reactivo para obtener resultados óptimos. Este anticuerpo ha sido desarrollado y certificado para la aplicación de bioimagen. Sin embargo, no se realiza una prueba de bioimagen de rutina en todos los lotes. Se recomienda a los investigadores titular el reactivo para un rendimiento óptimo. Triton es una marca registrada de Dow Chemical Company. Todas las proteínas séricas provienen de mataderos inspeccionados por el USDA ubicados en Estados Unidos. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para conocer los protocolos técnicos.