BD, 611202, BD Transduction Laboratories™ Anti-Oct3/4 de ratón purificado

Nombre alternativo: Oct3, OTF3, Oct4, OTF4, POU5F1
Reactividad: Ratón (prueba de control de calidad), humano (probado en desarrollo)
Isotipo: IgG1 de ratón, κ
Inmunógeno: proteína recombinante de ratón Oct3 aa. 252-372
Aplicación: Bioimagen, Western blot (probado rutinariamente), inmunofluorescencia (probado durante el desarrollo)
Peso molecular objetivo: 46 kDa
Concentración: 250 µg/ml
ID de registro: AB_398736
Tampón de almacenamiento: solución tamponada acuosa que contiene BSA, glicerol y ≤0,09 % de azida sódica.
Estado regulatorio: RUO
Preparación y almacenamiento: Conservar sin diluir a -20 °C. El anticuerpo monoclonal se purificó a partir del sobrenadante de cultivo tisular o de la ascitis mediante cromatografía de afinidad.
Procedimientos de ensayo recomendados: Procedimientos de ensayo recomendados Bioimagen 1. Siembre las células en un medio de cultivo apropiado a una densidad celular apropiada en una placa de imágenes BD Falcon™ de 96 pocillos (n.º de cat. 353219) y cultive durante la noche a 48 horas. 2. Retire el medio de cultivo de los pocillos, lave los pocillos dos veces con 100 µl de PBS 1x y fije las células añadiendo 100 µl de formaldehído fresco al 3,7 % en PBS o tampón de fijación BD Cytofix™ (n.º de cat. 554655) a cada pocillo e incubándolo durante 10 minutos a temperatura ambiente (TA). 3. Retire el fijador de los pocillos y lave los pocillos dos veces con 100 µl de PBS 1x. 4. Permeabilice las células añadiendo 100 µl de tampón BD Perm/Wash™ 1× (n.º de cat. 554723) a cada pocillo e incubándolos durante 30 minutos a temperatura ambiente. 5. Retire el permeabilizador y lave los pocillos dos veces con 100 µl de PBS 1x. 6. Diluya el anticuerpo en tampón BD Perm/Wash™ y tiña las células añadiendo 50 µl del anticuerpo diluido a cada pocillo e incubándolos durante 1 hora a temperatura ambiente. 7. Retire el anticuerpo diluido y lave los pocillos tres veces con 100 µl de PBS 1x. 8. Retire el PBS, diluya el reactivo de segundo paso en tampón BD Perm/Wash™ y tiña las células añadiendo 50 µl del reactivo de segundo paso diluido a cada pocillo e incubándolos durante 1 hora a temperatura ambiente. 9. Retire el reactivo diluido del segundo paso y lave los pocillos dos veces con 100 µl de PBS 1x. 10. Retire el PBS y contratine los núcleos añadiendo 100 µl de una solución de 2 µg/ml de Hoechst 33342 (p. ej., Sigma-Aldrich, n.º de cat. B2261) en PBS 1x a cada pocillo al menos 15 minutos antes de la adquisición de imágenes. 11. Observe y analice las células en un instrumento de adquisición de imágenes adecuado.
Avisos del producto: Dado que las aplicaciones varían, cada investigador debe titular el reactivo para obtener resultados óptimos. Todas las proteínas séricas provienen de mataderos inspeccionados por el USDA ubicados en Estados Unidos. Precaución: La azida sódica produce ácido hidrazoico, altamente tóxico en condiciones ácidas. Diluya los compuestos de azida en agua corriente antes de desecharlos para evitar la acumulación de depósitos potencialmente explosivos en las tuberías. Consulte www.bdbiosciences.com/us/s/resources para consultar los protocolos técnicos.