Bio-Rad, 1632084, Kit de extracción de proteínas ReadyPrep™ (Membrana II), 10 preparaciones

10 preparaciones, incluye 2 x 5 ml de tampón de rehidratación/muestra 2-D 1, 50 ml de tampón de lisis, 125 ml de reactivo de concentración de proteínas de membrana, 0,6 ml de tributilfosfina (TBP) 200 mM, 1 vial de almacenamiento, manual de instrucciones; para 10 extracciones de 100–200 mg de células o tejido
Descripción general
El kit de extracción de proteínas ReadyPrep (membrana II) está optimizado para el aislamiento de proteínas que contienen más de dos dominios transmembrana y proteínas que son resistentes a la extracción mediante el kit ReadyPrep Membrane I.
• Aísla proteínas complejas con 3 o más dominios transmembrana y aquellas resistentes a la extracción mediante el kit de extracción de proteínas ReadyPrep™ (membrana I)
• Útil para una amplia variedad de muestras biológicas, incluidos tejido animal, células animales, tejido vegetal, levadura y bacterias.
• Requiere ultracentrifugación; todo el procedimiento puede completarse en menos de 3 horas
• Incluye un tampón de rehidratación/muestra compatible con IEF, fuertemente caotrópico, que contiene el detergente ASB-14 para solubilizar proteínas de manera eficiente.
El kit de extracción de proteínas ReadyPrep (Membrana II) se basa en el método de Fujiki et al. (1982) para el aislamiento de fracciones de membrana celular tras la extracción con carbonato, y en la posterior adaptación de la técnica por Molloy et al. (2000). La incubación de tejido o células con el reactivo concentrador de proteínas de membrana de alto pH separa las proteínas débilmente asociadas de los fragmentos de membrana. Tras la ultracentrifugación y el lavado, el sedimento de membrana se solubiliza utilizando un tampón IEF u otro tampón. El tampón de rehidratación/muestra 2-D 1 incluido contiene el detergente zwitteriónico ASB-14. El kit también contiene el agente reductor tributilfosfina (TBP), que es más eficaz que el ditiotreitol (DTT) para mantener las proteínas reducidas en aplicaciones de PAGE 2-D.
Componentes del kit
Para 10 extracciones de 100–200 mg de células o tejido:
• Tampón de rehidratación/muestra 2-D 1, 2 viales, reconstituido en total 10 ml
• Tampón de lisis, reconstituido 50 ml
• Reactivo concentrador de proteínas de membrana, reconstituido 125 ml
• Agente reductor de TBP, 1 ampolla; 0,6 ml de tributilfosfina (TBP) 200 mM en 1-metil-2-pirrolidinona sellada bajo gas nitrógeno
• Vial vacío para almacenamiento de TBP
• Manual de instrucciones
Bio-Rad ofrece una gama de kits ReadyPrep para fraccionamiento por localización celular. Estos kits reducen la complejidad de las muestras, aumentan la detección e identificación de proteínas de baja abundancia y simplifican los estudios proteómicos.
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Documentación de apoyo
• Manual de instrucciones del kit de extracción de proteínas ReadyPrep (membrana II)
• Preparación de muestras: herramientas para la extracción, limpieza, fraccionamiento y agotamiento de muestras de proteínas (folleto)
• Manual de instrucciones de la tira IPG ReadyStrip
• Folleto del sistema PROTEAN i12 IEF
• Guía rápida del flujo de trabajo de la proteína de la célula huésped (HCP)
Referencias
Fujiki Y et al. (1982). Aislamiento de membranas intracelulares mediante tratamiento con carbonato de sodio: aplicación al retículo endoplasmático. J Cell Biology 93, 97–102. PMID: 7068762. Molloy MP et al. (2000). Análisis proteómico de la membrana externa de Escherichia coli. Eur J Biochem 267, 2871–2881. PMID: 10806384.