Bio-Rad, 1632088, Kit de extracción de proteínas ReadyPrep™ (Membrana I), 50 preparaciones

50 preparaciones, incluye 50 ml de tampón de extracción de proteínas de membrana 1 (M1), 50 ml de tampón de extracción de proteínas de membrana 2 (M2), 25 g de tampón de solubilización de proteínas (PSB), 30 ml de diluyente PSB, 1 kit de limpieza ReadyPrep 2-D (1632130), manual de instrucciones; para 50 extracciones de 25–50 mg de células o tejido
Descripción general
Utilice el kit de extracción de proteínas ReadyPrep (Membrana I) para la preparación sencilla, rápida y reproducible de fracciones de proteínas celulares altamente enriquecidas en proteínas de membrana e hidrofóbicas. Las proteínas aisladas con este kit pueden emplearse en diversas aplicaciones, como análisis en gel 2D, SDS-PAGE y Western blot.
• Aísla proteínas que contienen 1-2 dominios transmembrana, proteínas asociadas a la membrana y proteínas hidrófobas.
• El protocolo se puede utilizar con una amplia variedad de muestras biológicas.
• No requiere el uso de ultracentrifugación ni gradientes de densidad.
• Contiene un tampón de extracción fuertemente caotrópico para solubilizar eficientemente las proteínas.
• Incluye los componentes del kit de limpieza ReadyPrep 2-D para eliminar los componentes del tampón de extracción que pueden interferir con el IEF.
El kit de extracción de proteínas ReadyPrep (Membrana I) separa las proteínas de membrana mediante partición de fases dependiente de la temperatura con detergente Triton X-114 (Bordier 1981, Santoni et al. 2000). Las proteínas ancladas a la membrana o las que contienen uno o dos dominios transmembrana se reparten eficientemente a la fase rica en detergente. Las proteínas citoplasmáticas se reparten a la fase acuosa. Un pellet insoluble contiene proteínas de membrana más complejas. Las proteínas extraídas en las dos fases se tratan con el kit de limpieza 2-D ReadyPrep incluido para eliminar los componentes del kit que interfieren con la IEF. Los pellets se solubilizan eficientemente utilizando el tampón de extracción fuertemente caotrópico. Las proteínas solubilizadas pueden utilizarse inmediatamente en electroforesis en gel 2-D u otras aplicaciones.
Componentes del kit
Para 50 extracciones de 25–50 mg de células o tejido:
• Tampón de extracción de proteína de membrana 1 (M1), 50 ml
• Tampón de extracción de proteína de membrana 2 (M2), 50 ml
• Tampón de solubilización de proteínas (PSB), 25 g
• Diluyente PSB, 30 ml
• Kit de limpieza ReadyPrep 2-D (1632130)
• Manual de instrucciones
Bio-Rad ofrece una gama de kits ReadyPrep para fraccionamiento por localización celular. Estos kits reducen la complejidad de las muestras, aumentan la detección e identificación de proteínas de baja abundancia y simplifican los estudios proteómicos.
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Documentación de apoyo
• Manual de instrucciones del kit de extracción de proteínas ReadyPrep (membrana I)
• Preparación de muestras: herramientas para la extracción, limpieza, fraccionamiento y agotamiento de muestras de proteínas (folleto)
• Manual de instrucciones de la tira IPG ReadyStrip
• Folleto del sistema PROTEAN i12 IEF
• Guía rápida del flujo de trabajo de la proteína de la célula huésped (HCP)
Referencias
Bordier C (1981). Separación de fases de proteínas integrales de membrana en Triton X-114. J Biol Chem 256, 1604-1607. PMID: 6257680. Santoni V et al. (2000). Proteómica de membrana: Uso de efectos principales aditivos con un modelo de interacción multiplicativa para clasificar las proteínas de membrana plasmática según su solubilidad y propiedades electroforesis. Electrophoresis 21, 3329-3344. PMID: 11079553.