CST, 12130S, SignalSilence® Cbl-b siRNA I

ARNi para el estudio de Cbl-b en el área de investigación. Información de uso del producto CST recomienda la transfección con 100 nM de SignalSilence® Cbl-b siRNA I entre 48 y 72 horas antes de la lisis celular. Para el procedimiento de transfección, siga el protocolo proporcionado por el fabricante del reactivo. No dude en contactar con CST si tiene alguna pregunta sobre su uso. Cada vial contiene el equivalente a 100 transfecciones, lo que corresponde a una concentración final de siRNA de 100 nM por transfección en una placa de 24 pocillos con un volumen total de 300 µl por pocillo. Almacenamiento El ARNi SignalSilence® se suministra en agua sin ARNasa. Separar y almacenar a -20 °C. Fondo Las proteínas del linfoma de linaje Casitas B (Cbl) (en mamíferos, estas son c-Cbl, Cbl-b y Cbl-c) son una familia de ligasas E3 de ubiquitina-proteína de dedo RING de subunidad única que contienen múltiples motivos de interacción proteica (1). Todas las proteínas Cbl tienen un dominio de unión a tirosina quinasa (TKB) N-terminal altamente conservado que media las interacciones entre las proteínas Cbl y los residuos de tirosina fosforilados en sustratos Cbl. C-terminal al dedo RING, las proteínas Cbl tienen dominios ricos en prolina que median las interacciones con proteínas que contienen el dominio SH3. Los residuos de tirosina fosforilados median las interacciones con proteínas que contienen el dominio SH2, como la subunidad p85 de PI3K. Estos motivos de interacción proteína-proteína permiten que las proteínas de la familia Cbl funcionen como proteínas adaptadoras (2). Esta función adaptadora contribuye a las actividades dependientes de E3 de las proteínas Cbl al dirigirse a sustratos específicos para la ubiquitinación y degradación. La función adaptadora también contribuye a actividades no dependientes de E3, como el reclutamiento de proteínas involucradas en la internalización del receptor tirosina quinasa, la localización de proteínas Cbl en compartimentos subcelulares específicos y la activación de vías de señalización discretas (1). Cbl-b es una ubiquitina ligasa E3 con una organización de dominios casi idéntica a la de c-Cbl. El papel de Cbl-b en la fisiología de las células hematopoyéticas está bien documentado. La expresión de Cbl-b es importante para la regulación negativa de la expresión de TCR durante el reconocimiento de antígenos (2). Cbl-b también actúa como un potente regulador negativo de la cascada de señalización de CD28 a Vav y Rac1 a través de su capacidad para ubiquitinar la subunidad reguladora p85 de PI3K (3,4). Como regulador crítico de la anergia clonal en los linfocitos T, el ARNm y la proteína Cbl-b se regulan positivamente en las células T después de la movilización de calcio y la activación de la calcineurina (5). Los linfocitos T deficientes en Cbl-b son resistentes a la inducción de anergia (5). Se cree que los eventos moleculares que rigen este fenotipo están relacionados con defectos en la ubiquitinación de PLCγ1 y PKCθ, ya que la degradación de estas moléculas de señalización, que ocurre tras la reestimulación de linfocitos T anérgicos de tipo silvestre, no se produce en los linfocitos T deficientes en Cbl-b (5). Especificación REACTIVIDAD: H