CST, 13292S, SignalSilence® PKC alfa siRNA I

ARNi para estudiar PKCalpha en el área de investigación. Información de uso del producto CST recomienda la transfección con 100 nM de siRNA I de PKC alfa SignalSilence® de 48 a 72 horas antes de la lisis celular. Para el procedimiento de transfección, siga el protocolo proporcionado por el fabricante del reactivo. No dude en contactar con CST si tiene alguna pregunta sobre su uso. Cada vial contiene el equivalente a 100 transfecciones, lo que corresponde a una concentración final de siRNA de 100 nM por transfección en una placa de 24 pocillos con un volumen total de 300 µl por pocillo. Almacenamiento El ARNi SignalSilence® se suministra en agua sin ARNasa. Separar y almacenar a -20 °C. Fondo La activación de la proteína quinasa C (PKC) es uno de los primeros eventos en una cascada que controla una variedad de respuestas celulares, incluyendo secreción, expresión génica, proliferación y contracción muscular (1,2). Las isoformas de PKC pertenecen a tres grupos basados ​​en la dependencia del calcio y activadores. Las PKC clásicas son dependientes del calcio a través de sus dominios C2 y son activadas por fosfatidilserina (PS), diacilglicerol (DAG) y ésteres de forbol (TPA, PMA) a través de sus dominios C1 ricos en cisteína. Tanto las PKC nuevas como las atípicas son independientes del calcio, pero solo las PKC nuevas son activadas por PS, DAG y ésteres de forbol (3-5). Los miembros de estos tres grupos de PKC contienen un pseudosustrato o dominio autoinhibitorio que se une a los sitios de unión del sustrato en el dominio catalítico para prevenir la activación en ausencia de cofactores o activadores. El control de la actividad de la PKC se regula mediante tres eventos de fosforilación distintos. La fosforilación ocurre en Thr500 en el bucle de activación, en Thr641 mediante autofosforilación y en el sitio hidrofóbico carboxiterminal Ser660 (2). Las isoformas atípicas de la PKC carecen de fosforilación en la región hidrofóbica, lo que se correlaciona con la presencia de ácido glutámico en lugar de los residuos de serina o treonina que se encuentran en las isoformas más típicas de la PKC. La enzima PDK1 o un pariente cercano es responsable de la activación de la PKC. Una adición reciente a la superfamilia de la PKC es la PKCμ (PKD), que está regulada por DAG y TPA a través de su dominio C1. La PKD se distingue por la presencia de un dominio PH y por su reconocimiento de sustrato único y localización en el Golgi (6). Las quinasas relacionadas con la PKC (PRK) carecen del dominio C1 y no responden a DAG ni a ésteres de forbol. Los lípidos de fosfatidilinositol activan las PRK y las pequeñas GTPasas de la familia Rho se unen a la región de homología 1 (HR1) para regular la actividad de la quinasa PRK (7). Especificación REACTIVIDAD: H