CST, 13474S, Kit PTMScan® con motivo asimétrico de dimetilarginina [adme-R]

PTMScan para estudiar en el área de investigación. Información de uso del producto Las células se lisan en un tampón con urea, las proteínas celulares se digieren con proteasas y los péptidos resultantes se purifican mediante extracción en fase sólida en fase reversa. A continuación, los péptidos se someten a purificación por inmunoafinidad utilizando un anticuerpo PTMScan® Motif conjugado con perlas de agarosa de proteína A. Los péptidos no unidos se eliminan mediante lavado y los péptidos capturados con PTM se eluyen con ácido diluido. La purificación en fase reversa se realiza en micropuntas para desalinizar y separar los péptidos del anticuerpo antes de concentrar los péptidos enriquecidos para su análisis por LC-MS/MS. CST recomienda el uso del tampón PTMScan® IAP n.° 9993, incluido en el kit. El kit PTMScan ® Asymmetric Di-Methyl Arginine Motif [adme-R] tiene una versión de perlas magnéticas de mayor sensibilidad y especificidad: el kit PTMScan ® HS Asymmetric Di-Methyl Arginine Motif (adme-R) en formatos de 10 ensayos (n.° 18303) o 3 ensayos (n.° 71147). Almacenamiento Las perlas de anticuerpo se suministran en tampón IAP con 50 % de glicerol. Conservar a -20 °C. No alicuotar el anticuerpo. Protocolo Protocolos disponibles: PTMScan Fondo La metilación de la arginina es una PTM prevalente que se encuentra tanto en proteínas nucleares como citoplasmáticas. Las proteínas metiladas con arginina participan en muchos procesos celulares diferentes, incluyendo la regulación transcripcional, la transducción de señales, el metabolismo del ARN y la reparación del daño del ADN (1-3). La metilación de la arginina es llevada a cabo por la familia de enzimas arginina N-metiltransferasa (PRMT) que catalizan la transferencia de un grupo metilo de S-adenosilmetionina (AdoMet) a un nitrógeno guanidínico de la arginina (4). Hay tres tipos diferentes de metilación de la arginina: dimetilarginina asimétrica (aDMA, omega-NG,NG-dimetilarginina), donde dos grupos metilo se colocan en uno de los átomos de nitrógeno terminales del grupo guanidínico de la arginina; dimetilarginina simétrica (sDMA, omega-NG,NG-dimetilarginina), donde un grupo metilo se coloca en cada uno de los dos nitrógenos guanidínicos terminales de la arginina; y monometilarginina (MMA, omega-NG-metilarginina), donde un solo grupo metilo se coloca en uno de los átomos de nitrógeno terminales de la arginina. Cada una de estas modificaciones tiene consecuencias funcionales potencialmente diferentes. Aunque todas las proteínas PRMT catalizan la formación de MMA, las PRMT de tipo I (PRMT1, 3, 4, 6 y 8) añaden un grupo metilo adicional para producir aDMA, mientras que las PRMT de tipo II (PRMT5 y 7) producen sDMA. Los residuos de arginina metilados a menudo residen en dominios proteicos ricos en glicina-arginina (GAR), como las repeticiones RGG, RG y RXR (5). Sin embargo, PRMT4/CARM1 y PRMT5 metilan residuos de arginina dentro de motivos ricos en prolina-glicina-metionina (PGM) (6). En precursores neuronales embrionarios de ratón indiferenciados, la histona H4R3 dimetilada simétricamente es prevalente, pero en etapas posteriores del desarrollo se detectan modificaciones simétricas y asimétricas de la dimetil H4R3 en neuronas postmitóticas y oligodendrocitos en desarrollo. Esto implica que las modificaciones de sDMA podrían ser eventos reguladores epigenéticos negativos, mientras que las modificaciones de aDMA podrían indicar sitios de activación epigenética (7). Nombres alternativos ADMA