CST, 14478S, Kit de anticuerpo monoclonal de conejo PTMScan® Pilot Phospho-Tyrosine (P-Tyr-1000)

PTMScan para estudiar en el área de investigación. Información de uso del producto Las células se lisan en un tampón con urea, las proteínas celulares se digieren con proteasas y los péptidos resultantes se purifican mediante extracción en fase sólida en fase reversa. A continuación, los péptidos se someten a purificación por inmunoafinidad utilizando un anticuerpo PTMScan® Motif conjugado con perlas de agarosa de proteína A. Los péptidos no unidos se eliminan mediante lavado y los péptidos capturados con PTM se eluyen con ácido diluido. La purificación en fase reversa se realiza en micropuntas para desalinizar y separar los péptidos del anticuerpo antes de concentrar los péptidos enriquecidos para su análisis por LC-MS/MS. CST recomienda el uso del tampón PTMScan® IAP n.° 9993, incluido en el kit. El kit PTMScan ® Pilot Phospho-Tyrosine (P-Tyr-1000) tiene una versión de perlas magnéticas de mayor sensibilidad y especificidad: el kit PTMScan ® HS Phospho-Tyrosine (P-Tyr-1000) en formatos de 10 ensayos (n.° 38572) o 3 ensayos (n.° 29879). Almacenamiento Las microesferas de anticuerpo se suministran en tampón IAP con 50 % de glicerol. Conservar a -20 °C. No alicuotar el anticuerpo. Protocolo Protocolos disponibles: PTMScan Fondo La tecnología PhosphoScan emplea anticuerpos con motivos de residuos de fósforo (Tyr, Ser, Thr) para la purificación por inmunoafinidad de fosfopéptidos a partir de extractos celulares, en combinación con LC-MS/MS en tándem para identificar y cuantificar los cambios en los niveles de fosforilación (1). La fosforilación de tirosina desempeña un papel clave en la señalización celular. Estudios de investigación han demostrado que, en el cáncer, la actividad descontrolada de la tirosina quinasa puede impulsar la malignidad y la formación de tumores al generar señales inapropiadas de proliferación y supervivencia (2). Los anticuerpos específicos para la fosfotirosina han sido reactivos invaluables en estos estudios (3,4). El anticuerpo monoclonal de conejo fosfotirosina (P-Tyr-1000) n.° 8954, desarrollado por Cell Signaling Technology, proporciona una herramienta excepcionalmente sensible para estudiar la fosforilación de tirosina y monitorizar la actividad de la tirosina quinasa en el descubrimiento de fármacos de alto rendimiento. PTMScan (Y