CST, 14499S, Kit de motivo de acetil-lisina piloto PTMScan® [Ac-K]

PTMScan para estudiar en el área de investigación. Información de uso del producto Las células se lisan en un tampón con urea, las proteínas celulares se digieren con proteasas y los péptidos resultantes se purifican mediante extracción en fase sólida en fase reversa. A continuación, los péptidos se someten a purificación por inmunoafinidad utilizando un anticuerpo PTMScan® Motif conjugado con perlas de agarosa de proteína A. Los péptidos no unidos se eliminan mediante lavado y los péptidos capturados con PTM se eluyen con ácido diluido. La purificación en fase reversa se realiza en micropuntas para desalinizar y separar los péptidos del anticuerpo antes de concentrar los péptidos enriquecidos para su análisis por LC-MS/MS. CST recomienda el uso del tampón PTMScan® IAP n.° 9993, incluido en el kit. El kit PTMScan ® Pilot Acetyl-Lysine Motif [Ac-K] tiene una versión de perlas magnéticas de mayor sensibilidad y especificidad: el kit PTMScan ® HS Acetyl-Lysine (Ac-K) en formatos de 10 ensayos ( 46784 ) o 3 ensayos ( n.° 50071 ). Almacenamiento Las microesferas de anticuerpo se suministran en tampón IAP con 50 % de glicerol. Conservar a -20 °C. No alicuotar el anticuerpo. Protocolo Protocolos disponibles: PTMScan Fondo La acetilación de lisina, al igual que la fosforilación de serina, treonina o tirosina, es una importante modificación reversible que controla la actividad proteica. Los dominios amino-terminales conservados de las cuatro histonas centrales (H2A, H2B, H3 y H4) contienen lisinas que son acetiladas por las histonas acetiltransferasas (HAT) y desacetiladas por las histonas desacetilasas (HDAC) (1). La señalización que resulta en la acetilación/desacetilación de histonas, factores de transcripción y otras proteínas afecta a una amplia gama de procesos celulares, incluyendo la estructura de la cromatina y la actividad génica, el crecimiento celular, la diferenciación y la apoptosis (2-6). Estudios proteómicos recientes sugieren que la acetilación de residuos de lisina puede ser una forma generalizada e importante de modificación proteica postraduccional que afecta a miles de proteínas involucradas en el control del ciclo celular y el metabolismo, la longevidad, la polimerización de actina y el transporte nuclear (7,8). La regulación del estado de acetilación de proteínas se ve afectada en el cáncer y las enfermedades poliglutamínicas (9), y las HDAC se han convertido en objetivos prometedores para los fármacos contra el cáncer actualmente en desarrollo (10).