CST, 17848S, Kit PTMScan® de propionil-lisina [Prop-K]

PTMScan para estudiar en el área de investigación. Información de uso del producto Las células se lisan en un tampón con urea, las proteínas celulares se digieren con proteasas y los péptidos resultantes se purifican mediante extracción en fase sólida en fase reversa. A continuación, los péptidos se someten a purificación por inmunoafinidad utilizando un anticuerpo PTMScan® Motif conjugado con perlas de agarosa de proteína A. Los péptidos no unidos se eliminan mediante lavado y los péptidos capturados con PTM se eluyen con ácido diluido. La purificación en fase reversa se realiza en micropuntas para desalinizar y separar los péptidos del anticuerpo antes de concentrar los péptidos enriquecidos para su análisis por LC-MS/MS. CST recomienda el uso del tampón PTMScan® IAP n.° 9993, incluido en el kit. Almacenamiento Las perlas de anticuerpo se suministran en tampón IAP con 50 % de glicerol. Conservar a -20 °C. No alicuotar el anticuerpo. Protocolo Protocolos disponibles: PTMScan Fondo La lisina está sujeta a una amplia gama de modificaciones postraduccionales regulatorias debido a su cadena lateral del grupo ε-amino con carga positiva. Las más frecuentes son la ubiquitinación y la acetilación, que están altamente conservadas entre procariotas y eucariotas (1,2). La transferencia de grupos acilo desde los intermediarios metabólicos acetil-, succinil-, malonil-, glutaril-, butiril-, propionil- y crotonil-CoA neutraliza la carga positiva de la lisina y confiere alteraciones estructurales que afectan la función de la proteína sustrato. La acetilación de la lisina es catalizada por las histonas acetiltransferasas, HAT, que utilizan acetil-CoA como cofactor (3,4). La desacilación está mediada por las histonas desacetilasas, HDAC 1-11, y las sirtuinas 1-7 dependientes de NAD+. Algunas sirtuinas tienen poca o ninguna actividad desacetilasa, lo que sugiere que son más adecuadas para otros sustratos de acil lisina (5). Se ha informado de la actividad de la proteína propionil y butiril transferasa para p300 y la proteína de unión a CREB, dos acetiltransferasas que pueden autoacilar, así como dirigirse a las proteínas histonas y p53. Se ha demostrado que Sirt1 (Sir2 en levadura) tiene actividad despropionilasa y puede ser una despropionilasa eucariota importante (6,7). En el citosol, la acetil-CoA carboxilasa (ACC) convierte la acetil-CoA en malonil-CoA y la reacción inversa es catalizada por la malonil-CoA descarboxilasa (MCD), pero en las mitocondrias, la propionil-CoA carboxilasa asume el papel de ACC. Tanto la MCD como la ACC están reguladas por la AMPK, los niveles de glucosa y la insulina, lo que subraya su importancia en el metabolismo intermediario (8). Nombres alternativos Acilo; Acilación; Propionilo; PTMScan