CST, 20432S, PTMScan® Perlas magnéticas de Fe-NTA IMAC para enriquecimiento de fosfo

Reactivos de Afinidad y Purificación para estudio en el área de investigación. Información de uso del producto Las células se lisan en un tampón con urea, las proteínas celulares se digieren con proteasas y los péptidos resultantes se purifican mediante extracción en fase sólida en fase reversa. A continuación, los fosfopéptidos se enriquecen con las perlas PTMScan® IMAC. Los péptidos no unidos se eliminan mediante lavado y los fosfopéptidos capturados se eluyen con un tampón de pH básico. La purificación en fase reversa se realiza con micropuntas para desalinizar y separar los péptidos de las impurezas antes de concentrarlos para su análisis por LC-MS/MS. Se incluye un protocolo detallado con las perlas. Almacenamiento Las perlas magnéticas IMAC Fe-NTA se suministran en etanol al 20 %. Para un almacenamiento prolongado, sustituya el tampón por uno de larga duración (1:1:1 v/v/v de metanol, acetonitrilo y ácido acético al 0,01 %). Consulte el protocolo para obtener más información. Conservar a 4 °C. No congelar las perlas. Fondo La cromatografía de afinidad de metales inmovilizados, o IMAC, se ha utilizado ampliamente para enriquecer proteínas y péptidos de muestras biológicas mediante la unión a grupos de carga negativa. Los iones metálicos de transición divalentes Co , Cu , Ni y Zn se utilizan a menudo para purificar proteínas ricas en polihistidina o cisteína, así como proteínas con afinidad por metales. Los iones metálicos trivalentes, Fe , Ga , Al , así como Ti y Zr se utilizan comúnmente para el enriquecimiento de fosfopéptidos para estudios proteómicos (1). El ácido iminodiacético (IDA) o el ácido nitrilotriacético (NTA) se utilizan para quelar los iones metálicos a perlas recubiertas de agarosa. En estudios de comparación, se ha demostrado que el NTA tiene un mejor rendimiento que el IDA en la captura selectiva e identificación de más fosfopéptidos. Ga y Fe son comparables con respecto al número de fosfopéptidos identificados (2). En comparación con la cromatografía de afinidad por óxido metálico (MOAC) con TiO, la cromatografía de afinidad por Fe mostró un rendimiento ligeramente superior, con preferencia del TiO por fosfopéptidos ácidos (pI > 4) en comparación con el Fe, que prefirió péptidos menos ácidos (pI < 4) (3). Las perlas magnéticas PTMScan Fe-NTA ofrecen una herramienta eficiente para el enriquecimiento de fosfopéptidos con poco o ningún sesgo en el contexto de los residuos de fósforo. Pueden emplearse de forma independiente o en combinación con el enriquecimiento por inmunoafinidad para complementar cualquier estudio proteómico PhosphoScan LC-MS/MS. Nombres alternativos Enriquecimiento basado en Fe; IMAC; metal inmovilizado; afinidad metálica; enriquecimiento basado en metal; MOAC; fosfopéptido; fosfoproteoma; pSTY; TiO2