CST, 26101S, Kit PTMScan® de glutaril-lisina [Glut-K]

PTMScan para estudiar en el área de investigación. Información de uso del producto Las células se lisan en un tampón con urea, las proteínas celulares se digieren mediante proteasas y los péptidos resultantes se purifican mediante extracción en fase sólida en fase reversa. A continuación, los péptidos se someten a purificación por inmunoafinidad utilizando un anticuerpo PTMScan® Motif conjugado con perlas de agarosa de proteína A. Los péptidos no unidos se eliminan mediante lavado y los péptidos capturados que contienen PTM se eluyen con ácido diluido. La purificación en fase reversa se realiza en micropuntas para desalinizar y separar los péptidos del anticuerpo antes de concentrar los péptidos enriquecidos para el análisis LC-MS/MS. CST recomienda el uso del tampón PTMScan® IAP n.° 9993 incluido en el kit. Se encuentra disponible por separado un tampón PTMScan® IAP más detergente n.° 9992, que puede reducir las interacciones no específicas. Almacenamiento Las perlas de anticuerpo se suministran en tampón IAP con 50 % de glicerol. Conservar a -20 °C. No alicuotar el anticuerpo. Protocolo Protocolos disponibles: PTMScan Fondo La lisina está sujeta a una amplia gama de modificaciones postraduccionales regulatorias debido a su cadena lateral del grupo ε-amino con carga positiva. Las más frecuentes son la ubiquitinación y la acetilación, que están altamente conservadas entre procariotas y eucariotas (1,2). La transferencia de grupos acilo desde los intermediarios metabólicos acetil-, succinil-, malonil-, glutaril-, butiril-, propionil- y crotonil-CoA neutraliza la carga positiva de la lisina y confiere alteraciones estructurales que afectan la función de la proteína sustrato. La acetilación de la lisina es catalizada por las histonas acetiltransferasas, HAT, que utilizan acetil-CoA como cofactor (3,4). La desacilación está mediada por las histonas desacetilasas, HDAC 1-11, y las sirtuinas 1-7 dependientes de NAD+. Algunas sirtuinas tienen poca o ninguna actividad desacetilasa, lo que sugiere que son más adecuadas para otros sustratos de acil lisina (5). Los eventos de glutarilación de lisina predominan en las mitocondrias y ocurren principalmente en proteínas metabólicas. Similar a la malonilación y la succinilación, la transferencia de glutarilo de lisina probablemente esté mediada por una combinación de mecanismos no enzimáticos, termodinámicos y estequiométricos que impulsan la reacción en el entorno ácido de las mitocondrias en presencia de acetiltransferasas promiscuas (6). Los ratones knock out para SirT5 y glutaril-CoA deshidrogenasa (GCDH) exhiben niveles elevados de proteínas glutariladas al igual que los ratones con una dieta alta en triptófano. SirT5 es probablemente la principal desglutarilasa, como lo demuestra su actividad en la carbamoil fosfato sintasa 1 (CPS1), una proteína altamente glutarilada del ciclo de la urea (7). Nombres alternativos glutaril lisina; glutarilación; glutarato de lisina