CST, 28572S, Panel de citometría de flujo de respuesta a citocinas Th1 de células T humanas

Kit de ensayo para estudiar CD3epsilon/IFN-gamma/CD8A/CD4/TNF-alpha en el área de investigación. Información de uso del producto La producción de citocinas por las células T puede inducirse activando las células mediante diversos métodos. Estos incluyen la estimulación a través del receptor de células T mediante incubación con un anticuerpo agonista CD3, como el anticuerpo monoclonal de ratón activador de CD3 épsilon humano (OKT3) (bajo endotoxina, sin azida) n.º 92511, o el tratamiento con una combinación de PMA (forbol-12-miristato-13-acetato) e ionomicina. La adición de brefeldina A y monensina durante la estimulación celular limitará la secreción de citocinas y facilitará la detección de citocinas intracelulares. Todos los anticuerpos de este kit son compatibles con el protocolo de permeabilización de citometría de flujo Triton TM X-100 para anticuerpos directamente conjugados y pueden utilizarse en una única mezcla de tinción en células fijadas y permeabilizadas. Antes de la fijación e incubación con anticuerpos, recomendamos añadir un colorante de viabilidad fijable, como el Ghost Dye Violet 510 Fixable Viability Dye n.º 59863, para permitir la identificación y exclusión de células muertas del análisis. Estrategia de selección para observar la producción de citocinas Th1 por las células T: si se utilizó un colorante de viabilidad fijable, primero seleccione las células viables. A continuación, seleccione los linfocitos según la dispersión frontal y la dispersión lateral. Para observar la producción de citocinas por las células T auxiliares, seleccione las células CD3+CD4+ dentro de la selección de linfocitos y, a continuación, identifique las células dentro de esta selección que sean positivas para la tinción de IFN-γ y/o TNF-α. Para observar la producción de citocinas por las células T citotóxicas, seleccione las células CD3+CD8+ dentro de la selección de linfocitos y, a continuación, identifique las células dentro de esta selección que sean positivas para la tinción de IFN-γ y/o TNF-α. Almacenamiento El mAb de ratón CD3 (UCHT1) (conjugado PE), el mAb de ratón CD4 (RPA-T4) (conjugado violetFluor™ 450) y el mAb de ratón CD8α (RPA-T8) (conjugado PE-Cy7®) se suministran en 10 mM NaH2PO4, 150 mM NaCl, 0,09 % NaN3, 0,1 % gelatina, pH 7,2. El mAb de conejo TNF-α (D1G2) (conjugado Alexa Fluor® 647) y el mAb de conejo IFN-γ (D3H2) XP® (conjugado Alexa Fluor® 488) se suministran en PBS (pH 7,2), menos del 0,1 % de azida sódica y 2 mg/ml de BSA. Conservar a 4 °C. No alicuotar los anticuerpos. Proteger de la luz. No congelar. Todos los componentes de este kit son estables según la fecha impresa en la etiqueta del envase exterior cuando se almacenan a la temperatura recomendada. Consulte las etiquetas, fichas técnicas o páginas web del producto para conocer las fechas de caducidad específicas de cada componente. Protocolo Protocolos disponibles: Citometría de flujo (fijada/permeabilizada) Especificidad / Sensibilidad Cada anticuerpo del panel de citometría de flujo de respuesta a citocinas Th1 de células T humanas detecta los niveles endógenos de su proteína diana. El anticuerpo monoclonal de ratón CD3 (UCHT1) (conjugado PE) reconoce CD3ε. El anticuerpo monoclonal de ratón CD3 (UCHT1) (conjugado PE), el anticuerpo monoclonal de ratón CD4 (RPA-T4) (conjugado violetFluor 450) y el anticuerpo monoclonal de ratón CD8α (RPA-T8) (PE-Cy7) Reactividad de las especies: Humana Fuente / Purificación Los anticuerpos monoclonales se purificaron a partir del sobrenadante de cultivo tisular mediante cromatografía de afinidad. Los anticuerpos purificados se conjugaron en condiciones óptimas, eliminando el colorante no reaccionado de la preparación.