CST, 28854S, Kit de ensayo de ATP de luciferasa de luciérnaga

Kit de ensayo para estudiar en el área de investigación. Información de uso del producto Preparación del reactivo de sustrato: 1. Descongele el tampón; equilibre los reactivos suministrados a temperatura ambiente. 2. Reconstituya la mezcla de reacción de luciferasa de luciérnaga con todo el frasco de tampón de lisis celular. 3. Mezcle invirtiendo suavemente. Instrucciones de uso: Coloque las células de interés en la placa a densidades celulares predeterminadas específicas, a 100 µL por pocillo, en la placa de ensayo opaca de 96 pocillos. Prepare pocillos de control que contengan medio sin células. Se recomienda analizar las muestras por duplicado. Trate las células con los compuestos de interés e incube según las especificaciones deseadas. Añada 100 µL de la mezcla de reacción de luciferasa de luciérnaga a cada pocillo que contenga células y pocillos de control de solo medio. Mezcle el contenido en un agitador orbital durante 2 minutos y luego colóquelo sobre la mesa de trabajo. Deje que la placa se incube a temperatura ambiente durante 15 minutos más para estabilizar la señal luminiscente. Obtenga los resultados de un lector de placas con un ajuste de luminómetro. Nota: La señal absoluta puede variar según el lector de placas. Componentes adicionales no incluidos: · Placa de ensayo blanca opaca de 96 pocillos (p. ej., placa blanca MaxiSorp/FluoroNunc de 96 pocillos, ThermoFisher Scientific n.° 437591); · Pipetas monocanal y multicanal; · Agitador de placas orbital; · Lector de placas con ajuste de luminómetro. Almacenamiento Todos los componentes de este kit son estables durante al menos 24 meses si se almacenan a -80 °C. Tras la reconstitución de la mezcla de reacción de luciferasa de Firefly, se deben alicuotar en alícuotas de un solo uso para evitar múltiples ciclos de congelación y descongelación. Conservar a 4 °C hasta una semana o a -20 °C hasta un mes. Proteger de la luz. Especificidad / Sensibilidad La mezcla de reacción de luciferasa Firefly es un reactivo único para realizar ensayos de ATP en células cultivadas. El resultado de URL es directamente proporcional a la cantidad de células viables en la muestra. A mayor URL, mayor número de células viables. Fondo Los ensayos de viabilidad y proliferación celular se utilizan ampliamente en el descubrimiento de fármacos para estudiar factores de crecimiento, citocinas y agentes citotóxicos. El cribado de alto rendimiento, tanto en la detección temprana de compuestos en el descubrimiento de fármacos como en estudios posteriores de seguridad y toxicidad de fármacos, requiere un ensayo fiable, sensible y sencillo con la capacidad de analizar un gran número de muestras. Los ensayos de viabilidad celular luminiscente con luciferasa se desarrollaron basándose en la reacción enzimática de la luciferasa oxidando luciferina, lo que produce luz visible (1). La luciferasa aislada de la luciérnaga se ha utilizado ampliamente para estudiar la viabilidad celular mediante una reacción de varios pasos que implica ATP (2,3). A diferencia de los ensayos de proliferación celular, como el marcaje de ADN con timidina radiactiva o BrdU en células vivas, seguido de la cuantificación de la timidina incorporada (mediante la cuantificación de la radiactividad de la muestra) o BrdU (mediante el anticuerpo anti-BrdU), el ensayo de ATP con luciferasa de luciérnaga no requiere materiales radiactivos, fijación celular ni permeabilización celular. Es un procedimiento de ensayo de un solo paso que requiere la adición de un solo reactivo directamente a las células cultivadas en el medio de crecimiento; no son necesarios pasos de lavado ni pipeteo múltiple.