CST, 29580S, oligonucleótidos multiplex para sistemas Illumina (cebadores de índice único) (ChIP-seq, CUT&RUN)

Kit ChIP para estudiar en el área de investigación. Almacenamiento Conservar todos los componentes a -20 °C. Este producto es estable durante 12 meses si se almacena correctamente. Protocolo Protocolos disponibles: IP-seq de cromatina, CUT&RUN Especificidad / Sensibilidad Este kit se ha validado en combinación con el kit de preparación de bibliotecas de ADN para sistemas Illumina (ChIP-seq, CUT&RUN) n.° 56795 para generar bibliotecas de ADN cualificadas utilizando tan solo 0,5 ng de ADN ChIP o 0,1 ng de ADN CUT&RUN como materiales de partida. Las bibliotecas preparadas a partir de diferentes cantidades iniciales de ADN presentan perfiles, tasas de mapeo genómico, número de picos de unión identificados y relaciones señal-ruido similares en todo el genoma. Fondo El ensayo de inmunoprecipitación de cromatina (ChIP) es una técnica potente y versátil que se utiliza para investigar las interacciones proteína-ADN en el contexto cromatínico natural de la célula (1,2). Este ensayo puede utilizarse para identificar múltiples proteínas asociadas a una región específica del genoma, o, por el contrario, para identificar las numerosas regiones del genoma unidas por una proteína en particular (3-6). Puede utilizarse para determinar el orden específico de reclutamiento de diversas proteínas a un promotor génico o para medir la cantidad relativa de una modificación de histona específica en todo un locus génico (3,4). Además de las proteínas histonas, el ensayo ChIP puede utilizarse para analizar la unión de factores de transcripción y cofactores, factores de replicación del ADN y proteínas reparadoras del ADN. Al realizar el ensayo ChIP, las células o tejidos se fijan primero con formaldehído, un agente de entrecruzamiento reversible proteína-ADN que preserva las interacciones proteína-ADN que ocurren en la célula (1,2). Las células se lisan y la cromatina se recolecta y fragmenta mediante sonicación o digestión enzimática. Posteriormente, la cromatina se inmunoprecipita con anticuerpos específicos para una proteína o modificación de histona en particular. Cualquier secuencia de ADN asociada con la proteína o modificación de histona de interés coprecipitará como parte del complejo de cromatina reticulada, y la cantidad relativa de dicha secuencia de ADN se enriquecerá mediante el proceso de inmunoselección. Tras la inmunoprecipitación, se revierten los enlaces cruzados proteína-ADN y el ADN se purifica. La PCR estándar o la PCR cuantitativa en tiempo real se pueden utilizar para medir el grado de enriquecimiento de una secuencia de ADN específica mediante una inmunoprecipitación específica para la proteína (1,2). Como alternativa, el ensayo ChIP puede combinarse con técnicas de microarray de teselación genómica (ChIP en chip), secuenciación de alto rendimiento o estrategias de clonación, todas las cuales permiten el análisis de todo el genoma de las interacciones proteína-ADN y las modificaciones de histonas (5-8). Nombres alternativos Código de barras; ChIP; Kit ChIP; ChIP-seq; Secuenciación de ChIP; Inmunoprecipitación de cromatina; IP de cromatina; CnR; CUT & RUN; cortar y ejecutar; CUT and RUN; cortar y ejecutar; biblioteca de ADN; construcción de bibliotecas de ADN; preparación de bibliotecas de ADN; secuenciación de nueva generación; secuenciación NG; Oligo; Oligos; Secuenciación; Cebador de secuenciación