CST, 30299S, PTMScan® Péptidos de control Succinil-Lisina

Extractos celulares para estudio en el área de investigación. Información de uso del producto Usar con el protocolo del kit PTMScan ® de Cell Signaling Technology desde el paso de purificación por inmunoafinidad (IAP). Debido a que la cantidad óptima de PTMScan ® Control Peptides Succinyl-Lysine para los experimentos de cada usuario dependerá de factores únicos, como la sensibilidad del espectrómetro de masas, los usuarios pueden diluir estos péptidos de control según sea necesario. 1. Divida en alícuotas los PTMScan ® Control Peptides Succinyl-Lysine para almacenarlos como unidades de un solo uso a -20 °C o proceda a su uso inmediato. 2. Resuspenda los péptidos de muestra en el tampón y volumen adecuados, por ejemplo, 1,4 ml de tampón PTMScan ® IAP (1X). 3. Aclare los péptidos de muestra mediante centrifugación. 4. Transfiera los péptidos de muestra clarificados a tubos que contengan perlas de IAP. 5. Agregue 10 µL de PTMScan® Control Peptides Succinyl-Lysine a las perlas IAP y a los péptidos de muestra y mezcle bien. 6. Continúe con los flujos de trabajo de PTMScan® o PTMScan® HS en el paso de incubación de 2 horas. 7. Detecte PTMScan® Control Peptides Succinyl-Lysine en el archivo de datos LCMS. Almacenamiento Este producto es estable durante 24 meses si se almacena a -20 °C. Separe el contenido para evitar múltiples ciclos de congelación y descongelación. Fondo La lisina está sujeta a una amplia gama de modificaciones postraduccionales regulatorias debido a su cadena lateral del grupo ε-amino con carga positiva. Las más frecuentes son la ubiquitinación y la acetilación, que están altamente conservadas entre procariotas y eucariotas (1,2). La transferencia de grupos acilo desde los intermediarios metabólicos acetil-, succinil-, malonil-, glutaril-, butiril-, propionil- y crotonil-CoA neutraliza la carga positiva de la lisina y confiere alteraciones estructurales que afectan la función de la proteína sustrato. La acetilación de la lisina es catalizada por las histonas acetiltransferasas, HAT, que utilizan acetil-CoA como cofactor (3,4). La desacilación está mediada por las histonas desacetilasas, HDAC 1-11, y las sirtuinas 1-7 dependientes de NAD+. Algunas sirtuinas tienen poca o ninguna actividad desacetilasa, lo que sugiere que son más adecuadas para otros sustratos de acil lisina (5). Sirt5 es una desuccinilasa y demalonilasa predominantemente mitocondrial (5,6). En ausencia de una succiniltransferasa conocida, la succinilación probablemente esté impulsada por la concentración de succinil-CoA y el pH intracelular y está sujeta a fluctuaciones metabólicas (7,8). La succinilación de proteínas es especialmente prevalente entre las proteínas metabólicas mitocondriales y las bacterias, lo que consolida aún más el vínculo evolutivo entre las mitocondrias y los procariotas. A menudo ocurre en residuos de lisina que están alternativamente acetilados o ubiquitinados. Se identificaron más de mil sitios de succinilación de lisina en cientos de proteínas, incluyendo glutamato deshidrogenasa (15 sitios), malato deshidrogenasa, citrato sintasa, carbamoil fosfato sintasa 1 y proteínas histonas (9).