CST, 31415S, tampón de lavado 10X (CUT&RUN, CUT&Tag)

Buffer para estudiar en el área de investigación. Información de uso del producto Para los ensayos CUT&RUN y CUT&Tag, recomendamos preparar 2 ml de tampón de lavado completo 1X para cada línea celular y 100 µl adicionales para cada reacción o muestra de entrada. Por ejemplo, para preparar 2,5 ml de tampón de lavado completo 1X, añada 250 µl de tampón de lavado 10X (CUT&RUN, CUT&Tag), 25 µl de espermidina 100X n.° 27287 y 12,5 µl de cóctel de inhibidores de proteasa (200X) n.° 7012 a 2212,5 µl de agua libre de nucleasas justo antes de usar. Deje que alcance la temperatura ambiente para minimizar el estrés celular. Almacenamiento Conservar el tampón de lavado 10X (CUT&RUN, CUT&Tag) a 4 °C. Este producto es estable durante al menos 12 meses. Fondo Al igual que el ensayo de inmunoprecipitación de cromatina (ChIP), las técnicas de escisión bajo dianas y liberación mediante nucleasa (CUT&RUN) y de escisión bajo dianas y tagmentación (CUT&Tag) son potentes y versátiles que se utilizan para sondear las interacciones proteína-ADN en el contexto natural de la cromatina celular (1-7). CUT&RUN proporciona un ensayo rápido, robusto y de bajo número de células para la detección de interacciones proteína-ADN en la célula. A diferencia del ensayo ChIP, CUT&RUN no presenta reticulación con formaldehído, fragmentación de la cromatina ni inmunoprecipitación, lo que lo convierte en un método mucho más rápido y eficiente para enriquecer las interacciones proteína-ADN e identificar genes diana. CUT&RUN se puede realizar en menos de un día, desde células vivas hasta ADN purificado, y se ha demostrado que funciona con tan solo 500-1000 células por ensayo (1,2). En lugar de fragmentar toda la cromatina celular, como se hace en ChIP, CUT&RUN utiliza una digestión de la cromatina dirigida por anticuerpos, lo que resulta en una señal de fondo mucho menor que la observada en el ensayo ChIP. Como resultado, CUT&RUN requiere solo una décima parte de la profundidad de secuenciación requerida para los ensayos ChIP-seq (1,2). Finalmente, la inclusión de ADN de control simple enriquecido permite una cuantificación y normalización precisas de la unión de la proteína diana, algo que no es posible con el método ChIP. Esto proporciona una normalización efectiva de las señales entre muestras y entre experimentos. CUT&Tag comparte muchas de las ventajas del ensayo CUT&RUN, ya que proporciona un protocolo rápido, robusto y de bajo número de células para la detección de interacciones proteína-ADN en la célula. Además, el ensayo CUT&Tag añade un paso de ligadura del ADN adaptador, realizado por la enzima pAG-Tn5, en el que un ADN adaptador se liga directamente a fragmentos de ADN de la cromatina dirigidos por anticuerpos en la célula. Como resultado, la preparación posterior de la biblioteca de ADN es mucho más rápida y sencilla que la preparación de la biblioteca tras el ensayo CUT&RUN, sin necesidad de reparación de extremos de ADN, colas A ni ligadura del adaptador. CUT&Tag es muy eficaz para analizar modificaciones de histonas, además de mapear la unión de algunos factores de transcripción y cofactores. Nombres alternativos C&R; CnR; CORTAR Y CORRER; CORTAR Y ETIQUETAR; CORTAR Y ETIQUETAR; cortar y correr; CORTAR y CORRER; CORTAR Y CORRER; CORTAR Y ETIQUETAR; cortar y correr; CORTAR y EJECUTAR; CORTARyEtiquetar; modificación de histonas