CST, 32722S, Kit de eliminación de fluorescencia SignalStar™

Kit Buffer para estudio en el área de investigación. Información de uso del producto El kit de eliminación de fluorescencia SignalStar™ está diseñado para usarse siguiendo el protocolo del manual del ensayo IHC multiplex SignalStar® o el protocolo del ensayo IHC multiplex SignalStar® para su uso en el sistema de tinción de investigación totalmente automatizado BOND RX de Leica Biosystems. Siga todas las instrucciones y recomendaciones del protocolo original al usar el kit de eliminación de fluorescencia SignalStar™. Para el protocolo del manual del ensayo IHC multiplex SignalStar®: 1. Después de la segunda ronda de adquisición de imágenes, sumerja los portaobjetos en dH₂O durante >30 min para retirar con cuidado el cubreobjetos. 2. Combine los reactivos para crear la solución de eliminación de fluorescencia SignalStar: a. Para 5 portaobjetos: 75 µl de tampón dsDNasa 10X, 7,5 µl de dsDNasa y 667,5 µl de agua sin nucleasas n.° 12931. b. Para 10 portaobjetos: 150 µL de tampón de dsDNasa 10X, 15 µL de dsDNasa y 1335 µL de agua sin nucleasas n.º 12931. 3. Cubrir con parafilm y agitar en vórtex durante 10 s. Conservar todos los componentes del kit SignalStar en hielo al preparar las soluciones. Las soluciones SignalStar deben utilizarse inmediatamente una vez combinados todos los reactivos para la ejecución. 4. Incube los portaobjetos en 150 µL de solución de eliminación de fluorescencia SignalStar durante 2 h a 37 °C. (Se recomienda encarecidamente el uso de una cámara de humedad cubierta para evitar la evaporación). 5. Sumergir los portaobjetos en dH2O durante 30 s. 6. Completar los pasos adicionales de tinción y obtención de imágenes siguiendo el protocolo del fabricante. Para el protocolo del ensayo IHC multiplex SignalStar® para su uso en el sistema de tinción de investigación totalmente automatizado BOND RX de Leica Biosystems: 1. En el software BOND RX de Leica Biosystems, cree una copia del protocolo "CST SignalStar Imaging Round 2". 2. Cambie el nombre de la copia a "CST SignalStar Imaging Round 3" con la abreviatura "CST Rd3". 3. Seleccione "Mostrar pasos de lavado". 4. Elimine los pasos 8-63 y guarde solo los pasos 1-7 para la eliminación de fluorescencia. 5. Añada los pasos necesarios para cualquier tinción adicional siguiendo el protocolo del fabricante. 6. Seleccione "CST SignalStar" como sistema de detección preferido (Nota: Los pasos de tinción adicionales pueden requerir la selección de otros sistemas de detección. Para obtener ayuda, póngase en contacto con Leica Biosystems). 7. Seleccione "Crear protocolo". 8. Haga clic en el botón Guardar y, a continuación, en Sí para confirmar el mensaje de advertencia. 9. Después de la segunda ronda de adquisición de imágenes, sumerja los portaobjetos en dH₂O durante >30 min para retirar con cuidado el cubreobjetos. 10. Combine los reactivos para crear la solución de eliminación de fluorescencia SignalStar: a. Para 5 portaobjetos: 185 µL de tampón dsDNasa 10X, 18,5 µL de dsDNasa y 1646,5 µL de agua sin nucleasas n.º 12931 en un inserto de titulación BOND. b. Para 10 portaobjetos: 335 µL de tampón dsDNasa 10X, 33,5 µL de dsDNasa y 2981,5 µL de agua sin nucleasas n.º 12931 en un inserto de titulación BOND. 11. Cubra con parafilm y agite en vórtex durante 10 s. Conserve todos los componentes del kit SignalStar en hielo al preparar las soluciones. Las soluciones SignalStar deben usarse inmediatamente una vez combinados todos los reactivos para la serie. 12. En el software BOND RX, cree un estudio y añada portaobjetos. 13. Al añadir portaobjetos, utilice las siguientes opciones para la preparación del tejido en BOND: a. Preparación del portaobjetos: -- (sin valor/no requerido) b. Volumen de dispensación: 150 µL c. HIER: -- (sin valor/no requerido) 14. Seleccione "CST SignalStar Imaging Round 3", asegurándose de que la opción "Preparación del portaobjetos" esté seleccionada como "--" y que "HIER" esté seleccionada como "--". 15. Imprima las etiquetas, añádalas a los portaobjetos y colóquelos en la bandeja. 16. Coloque de 2 a 3 gotas de dH₂O en cada portaobjetos antes de añadir los cobertores BOND. 17. Inicie la serie BOND RX. Almacenamiento Todos los componentes de este kit son estables durante al menos 12 meses cuando se almacenan a la temperatura recomendada.