CST, 34200S, PTMScan® Péptidos de control O-GlcNAc

Extractos celulares para estudio en el área de investigación. Información de uso del producto Úselo con el protocolo del kit PTMScan ® de Cell Signaling Technology desde el paso de purificación por inmunoafinidad (IAP). Debido a que la cantidad óptima de PTMScan ® Control Peptides O-GlcNAc para los experimentos de cada usuario dependerá de factores únicos, como la sensibilidad del espectrómetro de masas, los usuarios pueden diluir estos péptidos de control según sea necesario. 1. Alícuota de PTMScan ® Control Peptides O-GlcNAc para almacenamiento como unidades de un solo uso a -20 °C o proceda a su uso inmediato. 2. Resuspenda los péptidos de muestra en el tampón y volumen adecuados, por ejemplo, 1,4 ml de tampón PTMScan ® IAP (1X). 3. Aclare los péptidos de muestra mediante centrifugación. 4. Transfiera los péptidos de muestra clarificados a tubos que contengan perlas de IAP. 5. Agregue 10 µL de PTMScan® Control Peptides O-GlcNAc a las perlas IAP y a los péptidos de muestra y mezcle bien. 6. Continúe con los flujos de trabajo de PTMScan® o PTMScan® HS en el paso de incubación de 2 horas. 7. Detecte PTMScan® Control Peptides O-GlcNAc en el archivo de datos LCMS. Almacenamiento Este producto es estable durante 24 meses si se almacena a -20 °C. Separe el contenido para evitar múltiples ciclos de congelación y descongelación. Fondo Una forma distintiva de glicosilación de proteínas, las fracciones de N-acetilglucosamina (GlcNAc) beta-enlazadas, pueden añadirse a los residuos de serina o treonina de las proteínas (1,2). Esto difiere de otras formas de glicosilación, ya que típicamente se trata de una sola fracción en lugar de los azúcares ramificados complejos que se estudian con mayor frecuencia. Se cree que estas modificaciones ocurren en un ciclo mucho más dinámico, similar a las modificaciones de fosforilación. Las proteínas modificadas con GlcNAc se encuentran en el citoplasma y el núcleo y se modulan mediante O-GlcNAc transferasas (OGT) específicas, así como por la actividad de la GlcNAcasa, que puede inhibirse utilizando el inhibidor Thiamet-G (TMG). El análisis de esta modificación mediante espectrometría de masas ha sido complejo debido a la pérdida del grupo GlcNAc durante la ionización y la fragmentación, pero métodos y tecnologías como la disociación por transferencia de electrones (ETD) están abriendo nuevas vías para el estudio de estas modificaciones. La O-GlcNAc podría desempeñar un papel importante en muchos procesos celulares, incluido el metabolismo, el crecimiento, la morfogénesis, la apoptosis y la transcripción, y puede desempeñar un papel crítico en el cáncer (3).