CST, 35741S, Kit de purificación de péptidos PTMScan®

Misceláneos para estudiar en el área de investigación. Información de uso del producto Notas: • Aproximadamente 20 mg de péptidos digeridos con proteasa se pueden purificar en una columna de fase reversa C18. • Los pasos descritos en la sección Instrucciones de uso utilizan alimentación por gravedad. En los casos en que el caudal haya disminuido drásticamente, puede aplicar una presión suave a la columna utilizando el émbolo de la jeringa. • Cada vez que se aplica una solución a la columna, se puede formar una burbuja de aire en la unión estrecha entre la jeringa y la entrada de la columna. Esto reducirá considerablemente el caudal. La burbuja debe eliminarse enjuagando con una punta de carga de gel ajustada a una pipeta P200. 1. Acidifique los péptidos antes de cargarlos agregando 1/20 del volumen de TFA al 20% para una concentración final de TFA al 1%. 2. Clarifique la muestra de péptido centrifugando a 1780 xg a temperatura ambiente durante 15 minutos. 3. Retire y guarde el émbolo de una jeringa de 10 ml y conéctelo al extremo corto de la columna C18. 4. Prehumedezca la columna de fase reversa C18 con 5 ml de acetonitrilo al 100 %. 5. Equilibre la columna secuencialmente con tres lavados de TFA al 0,1 % usando 1, 5 y 6 ml. 6. Cargue la muestra de péptido acidificado en la columna; los péptidos se unirán al material C18. 7. Lave la columna secuencialmente con tres lavados de TFA al 0,1 % usando 1, 5 y 6 ml. 8. Lave la columna con 2 ml de acetonitrilo al 5 % con TFA al 0,1 %. 9. Coloque cada columna sobre un tubo de recolección nuevo y limpio de 50 mL. 10. Eluya los péptidos 3 veces con 3 ml de acetonitrilo al 40 % con TFA al 0,1 %. 11. Los péptidos eluidos deben congelarse completamente para proceder al paso de liofilización. Congelar de 4 a 16 horas en un congelador a -80 °C o en un baño de hielo seco y etanol. Consultar el protocolo específico de PTMScan para más detalles. Almacenamiento Las columnas y jeringas pueden conservarse en su bolsa sellada original hasta por 24 meses a temperatura ambiente. Para obtener mejores resultados, cierre las bolsas abiertas con cinta adhesiva y guarde el envase resellado en un desecador hasta por 6 meses. Fondo La cromatografía de fase reversa es una técnica importante para la separación y purificación bioquímica analítica y preparativa. Las proteínas, péptidos y ácidos nucleicos hidrofóbicos pueden separarse mediante cromatografía de fase reversa con excelente resolución y recuperación. Además, el uso de modificadores de apareamiento iónico en la fase móvil permite la cromatografía de fase reversa de solutos cargados, como péptidos hidrofílicos y oligonucleótidos completamente desprotegidos. La cromatografía de fase reversa preparativa se ha utilizado en aplicaciones que abarcan desde la micropurificación de fragmentos de proteínas para secuenciación (1) hasta la purificación a escala de proceso de productos proteicos recombinantes (2) y el análisis proteómico por espectrometría de masas (3). Nombres alternativos C18; Sep-pak