CST, 43658S, Ubiquitina de ramificación múltiple TUBE-UBQLN1 (Conjugado de perlas magnéticas)

Reactivos de Afinidad y Purificación para estudio en el área de investigación. Información de uso del producto Añadir las perlas a una dilución de 1:20 a los lisados ​​celulares preparados en tampón de lisis celular 1X (10X) n.º 9803. Mezclar durante la noche a 4 °C. Lavar cinco veces en tampón de lisis celular 1X. Para obtener más información, consulte el protocolo de inmunoprecipitación para proteínas nativas. Para el lavado de perlas y el posterior lavado de los complejos purificados por afinidad, las perlas se pueden separar de la solución utilizando nuestro bastidor de separación magnética de 6 tubos n.º 7017. Colocar los tubos que contienen las perlas en el bastidor de separación magnética y esperar de 1 a 2 minutos a que la solución se aclare antes de retirar con cuidado el sobrenadante. Retirar los tubos del bastidor de separación magnética, añadir nueva solución y resuspender las perlas mediante una suave agitación vorticial o oscilación de los tubos. Almacenamiento Se suministra en tampón PBS (pH 7,2), Tween 20 al 0,1 %. Conservar a 4 °C. No alicuotar. Protocolo Protocolos disponibles: Inmunoprecipitación Especificidad / Sensibilidad TUBE-UBQLN1 se une a niveles endógenos de proteínas que contienen cadenas poliubiquitinadas. Se une a las cadenas de tetraubiquitina ramificadas K48 y K63. Reactividad de las especies: Se espera que se presenten todas las especies Fuente / Purificación TUBE, diseñado a partir del dominio de unión de ubiquitina de UBQLN1, se produjo en . Fondo La ubiquitina es una unidad polipeptídica conservada que desempeña un papel importante en la vía ubiquitina-proteasoma. Puede unirse covalentemente a numerosas proteínas celulares mediante el proceso de ubiquitinación, que dirige las proteínas para su degradación por el proteasoma 26S. Tres componentes intervienen en el proceso de conjugación proteína diana-ubiquitina. La ubiquitina se activa primero mediante la formación de un complejo tioléster con el componente de activación E1; posteriormente, la ubiquitina activada se transfiere a la proteína transportadora de ubiquitina E2, y luego de E2 a la ubiquitina ligasa E3 para su transporte final al épsilon-NH del residuo de lisina de la proteína diana (1-3). La vía ubiquitina-proteasoma se ha implicado en una amplia gama de procesos biológicos normales y en anomalías relacionadas con enfermedades. Se ha demostrado que varias proteínas como IβB, p53, cdc25A y Bcl-2 son dianas del proceso ubiquitina-proteasoma como parte de la regulación de la progresión del ciclo celular, la diferenciación, la respuesta al estrés celular y la apoptosis (4-7). Las proteínas sustrato se unen a la ubiquitina mediante siete residuos de lisina de ubiquitina distintos (Lys6, Lys11, Lys27, Lys29, Lys33, Lys48 y Lys63). La formación de una cadena de poliubiquitina ocurre cuando un residuo de lisina de ubiquitina se une a la glicina carboxiterminal de otra ubiquitina. Las proteínas poliubiquitinadas en residuos de lisina específicos muestran una tendencia a ser diana para diferentes procesos; las cadenas de poliubiquitina ligadas a K48 se dirigen principalmente a proteínas para la degradación proteasomal, mientras que las cadenas de poliubiquitina ligadas a K63 regulan la función proteica, la localización subcelular o las interacciones proteína-proteína (8). Las cadenas de poliubiquitina unidas a K63 ejercen funciones no proteolíticas, como el tráfico de proteínas, la activación de quinasas/fosfatasas y el control del daño del ADN, todo lo cual podría ser importante en la regulación de la supervivencia y el desarrollo del cáncer (9,10). Los dominios asociados a la ubiquitina (UBA) son regiones proteicas que interactúan con la ubiquitina. Las entidades de unión a la ubiquitina repetidas en tándem (TUBE) se diseñaron utilizando cuatro dominios UBA en tándem, basándose en la teoría de que las cadenas de tetraubiquitina son un requisito mínimo para la degradación proteasomal eficiente (11). Los TUBE diseñados con dominios UBA de UBQLN1 y RAD23A se unen a las cadenas de tetraubiquitina unidas a K48 y K63 y pueden usarse para purificar eficientemente las proteínas ubiquitiladas de los extractos celulares (12).