CST, 47099S, anticuerpo monoclonal de ratón híbrido ADN-ARN (S9.6)

Anticuerpo monoclonal para estudio. Validado funcionalmente. Disponible en dos tamaños. Altamente específico y rigurosamente validado internamente, el anticuerpo monoclonal de ratón híbrido ADN-ARN (S9.6) (CST n.° 47099) está listo para envío. Información de uso del producto Análisis de punto-borrón de bucles R utilizando especies de ADN-ARN hibridadas, ADN bicatenario (dsDNA) y ARN bicatenario (dsRNA) realizadas según el protocolo detallado publicado en PMID: 33554969. Brevemente: 1. Ordene los oligonucleótidos según PMID: 33554969. Resuspéndalos en tampón de hibridación a 10 mM de Tris (pH 8,0), 50 mM de NaCl y 1 mM de EDTA para alcanzar una concentración final de 100 µM. 2. Genere 10 mM de especies de ADN-ARN hibridadas, dsDNA y dsRNA incubando cantidades equimolares de los oligonucleótidos correspondientes en tampón de hibridación, calentándolos a 95 °C durante 10 min y luego dejándolos enfriar lentamente a temperatura ambiente para permitir la rehibridación de las hebras. 3. Prepare diluciones seriadas de oligos hibridados a concentraciones finales de 80, 20, 10 y 4 nM en tampón de hibridación. Cargue 50 ml de cada muestra en pocillos separados del equipo de transferencia puntual de 96 pocillos y aplíquelos a una membrana de nailon prehumedecida. 4. Aplique una ligera presión de vacío para extraer la solución a través de la membrana y envuelva la membrana, casi seca, en film transparente. 5. Reticule la membrana con UV a 1200 J/m² dos veces con un reticulador UV. 6. Prepare el tampón de bloqueo: leche al 5 % en solución salina tamponada con Tris y Tween 20 al 0,05 % (TBST); incube la membrana en 25 ml de tampón de bloqueo con agitación suave durante 1 h a temperatura ambiente. 7. Lave la membrana tres veces durante 5 min cada una con 15 mL de 1X TBST, luego incube durante la noche en anticuerpo primario a una dilución de 1:1,000 en 10 mL de tampón de bloqueo con agitación suave a 4 °C. 8. Lave la membrana tres veces durante 5 min cada una con 15 mL de 1X TBST, luego incube con Anti-mouse IgG, anticuerpo ligado a HRP # 7076 a 1:2,000 en 10 mL de tampón de bloqueo con agitación suave durante 1 hora a temperatura ambiente. 9. Lave la membrana tres veces durante 5 min cada una con 15 mL de 1X TBST, luego revele con reactivos de quimioluminiscencia mejorada (ECL) para adquirir señales para la imagen. Funcional: 1:1000 Almacenamiento Se suministra en 10 mM de HEPES sódico (pH 7,5), 150 mM de NaCl, 100 µg/mL de BSA, 50 % de glicerol y menos del 0,02 % de azida sódica. Conservar a -20 °C. No alicuotar el anticuerpo. Especificidad / Sensibilidad El anticuerpo monoclonal de ratón híbrido ADN-ARN (S9.6) reconoce niveles endógenos de bucles R de ADN-ARN. Este anticuerpo se ha validado mediante ensayos de punto-borrón y muestra especificidad para Reactividad de las especies: Se espera que se presenten todas las especies Fuente / Purificación El anticuerpo monoclonal se produce inmunizando animales con el dúplex heteropolímero ADN-ARN generado por la transcripción del ADN monocatenario (ssDNA) φX174 con la ARN polimerasa dependiente de ADN. Fondo Los bucles R son estructuras de ácido nucleico tricatenario compuestas por un híbrido ADN-ARN y un ADN monocatenario (ssADN). Estas estructuras se forman durante la transcripción cuando un ARN naciente recién sintetizado se aparea con su cadena molde de ADN y desplaza la cadena de ADN no molde. Se reconoce que los bucles R desempeñan funciones clave en diversos procesos celulares, como la regulación génica, la terminación de la transcripción y la respuesta al daño del ADN (1). Aunque los bucles R se forman de forma natural durante la transcripción, su formación persistente y la falta de resolución adecuada pueden tener efectos perjudiciales en la integridad del genoma (2). En relación con esto, la formación y acumulación aberrantes de bucles R se han vinculado a un número creciente de enfermedades humanas, como las enfermedades neurodegenerativas, la ataxia de Friedreich y la esclerosis lateral amiotrófica (ELA), la inflamación intestinal y, lo más importante, varios tipos de cáncer (3-6). Especificación REACTIVIDAD: Todas SENSIBILIDAD: Endógena Fuente/Isotipo: IgG2a de ratón