CST, 48105S, Tope de parada CUT&RUN 4X

Buffer para estudiar en el área de investigación. Información de uso del producto Para el ensayo CUT&RUN, recomendamos añadir 37,5 µl de tampón de parada CUT&RUN 4X, 3,75 µl de solución de digitonina n.° 16359 y 0,75 µl de ARNasa A (10 mg/ml) n.° 7013 a 108 µl de agua libre de nucleasas (150 µl por reacción) justo antes de su uso. A continuación, incubar con la muestra a 37 °C durante 10 min. Si se desea, se puede añadir una cantidad adecuada de ADN de adición para normalización de muestras al tampón de parada CUT&RUN 4X. Almacenamiento Conserve el tampón de parada CUT&RUN 4X a -20 °C. Este producto es estable durante al menos 12 meses. Fondo Al igual que el ensayo de inmunoprecipitación de cromatina (ChIP), la técnica de escisión bajo dianas y liberación mediante nucleasa (CUT&RUN) es potente y versátil, utilizada para sondear las interacciones proteína-ADN en el contexto natural de la cromatina celular (1-4). CUT&RUN proporciona un ensayo rápido, robusto y de bajo número de células para la detección de interacciones proteína-ADN en la célula. A diferencia del ensayo ChIP, CUT&RUN no presenta reticulación con formaldehído, fragmentación de la cromatina ni inmunoprecipitación, lo que lo convierte en un método mucho más rápido y eficiente para enriquecer las interacciones proteína-ADN e identificar genes diana. CUT&RUN se puede realizar en menos de un día, desde células vivas hasta ADN purificado, y se ha demostrado que funciona con tan solo 500-1000 células por ensayo (1,2). En lugar de fragmentar toda la cromatina celular, como se hace en ChIP, CUT&RUN utiliza una digestión de la cromatina dirigida por anticuerpos, lo que resulta en una señal de fondo mucho menor que la observada en el ensayo ChIP. Como resultado, CUT&RUN requiere solo una décima parte de la profundidad de secuenciación requerida para los ensayos ChIP-seq (1,2). Finalmente, la inclusión de ADN de control simple permite una cuantificación y normalización precisas de la unión de la proteína diana, algo que no es posible con el método ChIP. Esto proporciona una normalización eficaz de la señal entre muestras y entre experimentos. Nombres alternativos C&R; CnR; cortar y ejecutar; cortar y ejecutar; cortar y ejecutar; cortar y ejecutar; cortar y ejecutar; CUTandRUN; modificación de histonas