CST, 52708S, Ubiquitina de ramificación múltiple TUBE-RAD23A (conjugado de criptato de europio trFluor™)

Reactivos de Afinidad y Purificación para estudio en el área de investigación. Información de uso del producto Los conjugados de criptato de europio trFluor™ son ideales para ensayos de interacción proteína-proteína, tecnologías de inmunoensayo por pares o cribado de alto rendimiento donde se requiere mayor sensibilidad y detección cuantitativa. El largo tiempo de desintegración fluorescente del criptato de europio mejora la relación señal-fondo en comparación con los conjugados de colorantes fluorescentes. Los métodos que utilizan conjugados de criptato de europio incluyen, entre otros, TR-FRET, donde los donantes marcados con criptato de europio se emparejan con anticuerpos aceptores marcados con fluoróforos rojos, como Alexa Fluor® 647 o APC. Contáctenos si necesita un clon de anticuerpo aceptor conjugado con un colorante rojo a una concentración personalizada, una formulación sin portador o una solución de envasado más personalizada. Nota: Se recomienda añadir fluoruro de potasio (KF) en el rango de dilución del tampón de ensayo de 40-400 mM para mejorar la señal fluorescente. El usuario final debe determinar las diluciones óptimas y las concentraciones de trabajo tanto de los anticuerpos conjugados como del KF. Almacenamiento Se suministra en PBS (pH 7,2), con menos del 0,1 % de azida sódica y 2 mg/ml de BSA. Conservar a 4 °C. No alicuotar. Proteger de la luz. No congelar. Especificidad / Sensibilidad TUBE-RAD23A se une a niveles endógenos de proteínas que contienen cadenas poliubiquitinadas. Se une a las cadenas de tetraubiquitina ramificadas K48 y K63. Fuente / Purificación TUBE, diseñado a partir del dominio de unión a ubiquitina de RAD23A, se produjo en [insertar contexto]. La proteína ubiquitina pan-ramificada TUBE-RAD23A también contiene una etiqueta GST, una etiqueta His y una etiqueta V5. Fondo La ubiquitina es una unidad polipeptídica conservada que desempeña un papel importante en la vía ubiquitina-proteasoma. Puede unirse covalentemente a numerosas proteínas celulares mediante el proceso de ubiquitinación, que dirige las proteínas para su degradación por el proteasoma 26S. Tres componentes intervienen en el proceso de conjugación proteína diana-ubiquitina. La ubiquitina se activa primero mediante la formación de un complejo tioléster con el componente de activación E1; posteriormente, la ubiquitina activada se transfiere a la proteína transportadora de ubiquitina E2, y luego de E2 a la ubiquitina ligasa E3 para su transporte final al épsilon-NH del residuo de lisina de la proteína diana (1-3). La vía ubiquitina-proteasoma se ha implicado en una amplia gama de procesos biológicos normales y en anomalías relacionadas con enfermedades. Se ha demostrado que varias proteínas como IβB, p53, cdc25A y Bcl-2 son dianas del proceso ubiquitina-proteasoma como parte de la regulación de la progresión del ciclo celular, la diferenciación, la respuesta al estrés celular y la apoptosis (4-7). Las proteínas sustrato se unen a la ubiquitina mediante siete residuos de lisina de ubiquitina distintos (Lys6, Lys11, Lys27, Lys29, Lys33, Lys48 y Lys63). La formación de una cadena de poliubiquitina ocurre cuando un residuo de lisina de ubiquitina se une a la glicina carboxiterminal de otra ubiquitina. Las proteínas poliubiquitinadas en residuos de lisina específicos muestran una tendencia a ser diana para diferentes procesos; las cadenas de poliubiquitina ligadas a K48 se dirigen principalmente a proteínas para la degradación proteasomal, mientras que las cadenas de poliubiquitina ligadas a K63 regulan la función proteica, la localización subcelular o las interacciones proteína-proteína (8). Las cadenas de poliubiquitina unidas a K63 ejercen funciones no proteolíticas, como el tráfico de proteínas, la activación de quinasas/fosfatasas y el control del daño del ADN, todo lo cual podría ser importante en la regulación de la supervivencia y el desarrollo del cáncer (9,10). Los dominios asociados a la ubiquitina (UBA) son regiones proteicas que interactúan con la ubiquitina. Las entidades de unión a la ubiquitina repetidas en tándem (TUBE) se diseñaron utilizando cuatro dominios UBA en tándem, basándose en la teoría de que las cadenas de tetraubiquitina son un requisito mínimo para la degradación proteasomal eficiente (11). Los TUBE diseñados con dominios UBA de UBQLN1 y RAD23A se unen a las cadenas de tetraubiquitina unidas a K48 y K63 y pueden usarse para purificar eficientemente las proteínas ubiquitiladas de los extractos celulares (12).